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拟南芥雄配子体型雄性不育突变体kd268的鉴定及基因克隆

中文摘要第1-5页
英文摘要第5-6页
缩略词第6-12页
第一章 文献综述第12-33页
   ·拟南芥简介第12-13页
     ·拟南芥的特征第12-13页
     ·模式植物拟南芥的研究第13页
   ·植物雄性生殖器官的发育第13-21页
     ·拟南芥花药的发育第14-20页
     ·受精作用第20-21页
   ·植物雄配子体形成及发育相关基因的研究第21-25页
     ·植物雄配子体的形成及功能第21-22页
     ·植物雄配子体发育相关基因第22-25页
   ·植物雄性不育及其应用第25-26页
     ·植物雄性不育的表型特征第25页
     ·植物雄性不育的分类第25-26页
     ·植物雄性不育的基因工程应用第26页
   ·植物雄性不育突变体的获取方法第26-31页
     ·植物雄性不育突变体的获取方法第27-28页
     ·Ac/Ds系统简介第28-29页
     ·基因陷阱技术第29-30页
     ·Ac/Ds转座子基因陷阱技术构建雄配子体型突变体的方法第30-31页
   ·TAIL-PCR技术简介第31-32页
   ·本项目研究的目的和意义第32-33页
第二章 实验材料与方法第33-49页
   ·实验材料第33-35页
     ·植物材料、菌株及质粒载体第33页
     ·各种酶及试剂第33页
     ·植物培养材料第33-34页
     ·实验主要仪器第34-35页
   ·常用培养基和溶液配制第35-36页
     ·培养基配制第35页
     ·常用溶液配制第35-36页
   ·实验方法第36-49页
     ·植物培养及生长条件第36页
     ·遗传学类实验方法第36-37页
     ·细胞生物学类实验方法第37-39页
       ·光镜及扫描电镜观察花粉形态第37页
       ·花粉Alexander染色第37页
       ·花粉DAPI染色第37-38页
       ·花粉体外萌发培养第38页
       ·GUS基因组织化学染色法第38-39页
     ·分子生物学类实验方法第39-49页
       ·拟南芥基因组DNA提取第39页
       ·TAIL-PCR方法第39-42页
       ·普通PCR扩增第42页
       ·PCR产物的TA克隆第42-43页
       ·菌体培养第43页
       ·菌种保存第43页
       ·质粒提取第43-45页
       ·E.coli超级感受态细胞的制备第45-46页
       ·质粒酶切第46页
       ·连接反应第46页
       ·质粒转化(E.coli)第46页
       ·核酸的电泳第46页
       ·DNA片段的回收第46-47页
       ·农杆菌感受态细胞的制备第47-48页
       ·电击转化农杆菌第48页
       ·拟南芥植株的转化及抗性苗的筛选第48-49页
第三章 实验结果与分析第49-75页
   ·kd268突变体的遗传分析第49-50页
     ·kd268突变体自交Kan分离比第49页
     ·kd268突变体与Ler野生型正反交实验结果第49-50页
   ·kd268突变体表型观察第50-53页
     ·kd268突变体花粉形态观察第50-51页
     ·花粉Alexander染色第51-52页
     ·花粉的DAPI染色第52页
     ·花粉体外萌发第52-53页
     ·kd268突变体植株表型观察第53页
   ·kd268突变体突变基因的定位、克隆与恢复突变分析第53-75页
     ·TAIL-PCR方法定位kd268突变体Ds插入位点第54-58页
       ·Edwards法提取kd268突变体植株基因组DNA第55页
       ·TAIL-PCR扩增突变体Ds插入位点两侧侧翼序列第55-56页
       ·验证PCR第56-58页
     ·At2g37680、At2g37690基因克隆和恢复突变载体的构建第58-67页
       ·At2g37680基因的克隆第58-63页
       ·At2g37690基因的克隆第63-67页
     ·kd268突变体恢复突变分析第67-71页
       ·At2g37680基因对kd268突变体植株的恢复突变分析第68-69页
       ·At2g37690基因对kd268突变体植株的恢复突变分析第69-71页
     ·At2g37690基因组织定位情况初步分析第71-75页
       ·At2g37690 promotor::GUS表达载体的构建第71-74页
       ·At2g37690基因的组织定位情况初步分析第74-75页
第四章 讨论第75-77页
第五章 结论与展望第77-80页
   ·kd268突变体为雄配子体型雄性不育突变体第77页
   ·kd268突变体花粉发育缺陷第77页
   ·kd268突变体植株表现为营养体生长缺陷第77页
   ·TAIL-PCR方法定位kd268突变体Ds插入位点第77-78页
   ·At2g37690全长基因组序列能够互补kd268突变体植株第78页
   ·At2g37690基因组织定位为组成形表达第78-80页
参考文献第80-86页
引物附表第86-87页
致谢第87-89页
硕士期间发表论文第89页

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