| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 缩略词表 | 第11-12页 |
| 第一章 前言 | 第12-23页 |
| ·纤维素与纤维素降解微生物 | 第12-15页 |
| ·纤维素的结构特征 | 第13-14页 |
| ·产纤维素酶的微生物 | 第14页 |
| ·哈氏嗜纤维菌的研究进展 | 第14-15页 |
| ·利用纤维素生产生物能源的研究 | 第15-20页 |
| ·传统的纤维素利用方法 | 第15-16页 |
| ·生物质能源的分类 | 第16页 |
| ·丁醇作为燃料的优势 | 第16-17页 |
| ·丁醇的生产方式 | 第17-20页 |
| ·大肠杆菌代谢工程改造生产高级醇的进一步策略 | 第20页 |
| ·α-异丙基苹果酸合酶的研究概况 | 第20-21页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第21-23页 |
| 第二章 不同来源α-异丙基苹果酸合酶蛋白结构分析 | 第23-32页 |
| ·材料方法 | 第23-24页 |
| ·序列及结构信息来源 | 第23页 |
| ·生物信息学工具 | 第23-24页 |
| ·结果与分析 | 第24-31页 |
| ·α-IPMS蛋白同源性分析 | 第24-25页 |
| ·α-IPMS蛋白三级结构比较 | 第25-31页 |
| ·本章小结 | 第31-32页 |
| 第三章 C.hutchinsonii α-异丙基苹果酸合酶的异源表达与分离纯化 | 第32-44页 |
| ·材料 | 第32-34页 |
| ·质粒、菌株和培养基 | 第32-33页 |
| ·主要试剂 | 第33页 |
| ·主要仪器 | 第33页 |
| ·实验所用缓冲液 | 第33-34页 |
| ·实验方法 | 第34-38页 |
| ·C.hutchinsonii和E.coli DE3基因组的提取 | 第34页 |
| ·chu3741与ecd00076基因的克隆 | 第34-36页 |
| ·大肠杆菌感受态制备 | 第36页 |
| ·大肠杆菌DH5α转化 | 第36页 |
| ·试剂盒提取质粒 | 第36-37页 |
| ·DNA序列测定 | 第37页 |
| ·重组蛋白在大肠杆菌中的诱导表达 | 第37-38页 |
| ·粗酶液的制备 | 第38页 |
| ·蛋白质含量测定 | 第38页 |
| ·His tag纯化蛋白 | 第38页 |
| ·结果分析 | 第38-43页 |
| ·C.hutchinsonii CHU_3741蛋白在大肠杆菌中的重组表达 | 第39-41页 |
| ·ECD_00076蛋白在大肠杆菌中的重组表达 | 第41-43页 |
| ·本章小结 | 第43-44页 |
| 第四章 C.hutchinsonii和E.coli α-异丙基苹果酸合酶酶学性质研究 | 第44-53页 |
| ·、实验材料 | 第44页 |
| ·试剂 | 第44页 |
| ·实验器材 | 第44页 |
| ·实验方法 | 第44-47页 |
| ·蛋白含量测定 | 第44-45页 |
| ·α-异丙基苹果酸合酶的酶活测定方法 | 第45页 |
| ·CoASH的浓度标准曲线 | 第45-46页 |
| ·酶最适反应温度的测定方法 | 第46页 |
| ·酶最适反应pH值的测定方法 | 第46页 |
| ·金属离子对酶活性的影响 | 第46-47页 |
| ·亮氨酸对酶活性的影响 | 第47页 |
| ·酶的动力学参数测定 | 第47页 |
| ·实验结果 | 第47-52页 |
| ·C.hutchinsonii和E.coli α-IPMS的最适反应温度 | 第47-48页 |
| ·C.hutchinsonii和E.coli α-IPMS的最适反应pH值 | 第48-49页 |
| ·金属离子对α-IPMS酶活性的影响 | 第49-50页 |
| ·亮氨酸对α-IPMS酶活性的影响 | 第50-51页 |
| ·酶的动力学参数测定 | 第51-52页 |
| ·本章小结 | 第52-53页 |
| 第五章 C.hutchinsonii α-异丙基苹果酸合酶突变体性质研究 | 第53-59页 |
| ·实验材料 | 第53页 |
| ·实验方法 | 第53-55页 |
| ·引物设计 | 第53-54页 |
| ·D14G基因片段的获取方法 | 第54页 |
| ·PCR反应体系及程序 | 第54页 |
| ·重组质粒的构建及验证 | 第54页 |
| ·BL21感受态制备 | 第54页 |
| ·粗酶液的制备 | 第54页 |
| ·蛋白质含量的测定 | 第54-55页 |
| ·结果及分析 | 第55-58页 |
| ·D14G、T171S和Y311F基因的克隆 | 第55页 |
| ·pET-D14G、pET-T171S和pET-Y311F载体的构建及验证 | 第55-56页 |
| ·突变体蛋白的诱导表达及纯化 | 第56-57页 |
| ·突变体蛋白酶学性质研究 | 第57-58页 |
| ·本章小结 | 第58-59页 |
| 全文总结 | 第59-61页 |
| 参考文献 | 第61-64页 |
| 致谢 | 第64-66页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第66页 |
