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抗RANKL单克隆抗体在大鼠类风湿性关节炎模型中的应用及RANKL转录调控的探索性研究

第1-7页
英文缩写索引第7-9页
中文摘要第9-13页
Abstract第13-16页
第一部分 抗体生产——抗RANKL单克隆抗体第16-27页
 1.Rankl基因的克隆第16-20页
   ·试剂和材料第16页
   ·实验步骤和结果第16-17页
   ·RT-PCR合成大鼠cDNA第17-18页
   ·PCR反应合成Rankl基因第18-19页
   ·Rankl基因的TA克隆第19-20页
   ·序列分析结果第20页
 2.杂交瘤技术合成抗RANKL单克隆抗体第20-26页
   ·抗体生产流程第21-26页
   ·抗体最终验证数据第26页
 3.小结第26-27页
第二部分 动物实验——类风湿性关节炎动物模型的建立及干预试验第27-36页
 1.材料与方法第27-29页
   ·实验动物第27页
   ·主要试剂第27页
   ·大鼠关节炎的制备第27-28页
   ·大鼠关节炎足体积的测定第28页
   ·大鼠足部X线的拍摄第28页
   ·大鼠足部组织切片观察病理改变第28页
   ·统计学方法第28-29页
 2.结果第29-33页
   ·建模大鼠基本情况观察第29-30页
   ·大鼠建模后后爪外观变化第30页
   ·大鼠爪厚度变化第30-31页
   ·ELISA检测TNF-α、IL-1血清浓度第31页
   ·影像学检查第31-32页
   ·病理学检查第32-33页
 3.小结第33-36页
   ·经前期试验摸索,为提高建模成功率,采取Ⅱ型牛胶原与弗氏佐剂充分乳化,并且重复注射加强免疫的方式造模第33-34页
   ·试验中大鼠的给药剂量及时间间隔第34页
   ·关节腔注射给药第34-36页
第三部分 分子生物学探索——RANKL转录调控及原代细胞功能试验第36-63页
 1.材料与方法第36-50页
   ·细胞系和质粒第36页
   ·主要试剂和仪器第36-40页
   ·实验方法第40-50页
 2. 结果第50-54页
   ·报告基因结果第50-51页
   ·RANKL启动子TEAD结合序列点突变质粒制备第51-52页
   ·Yap基因提高RANKL转录活性的浓度梯度试验第52页
   ·免疫荧光检测fas activating antibody诱导OB及RAW264.7细胞凋亡过程中Yap定位第52-53页
   ·transette原核表达并提取RANKL蛋白第53页
   ·Fas activating ligand诱导raw264.7凋亡浓度梯度试验第53-54页
   ·制备逆转录病毒第54页
 3. 小结第54-56页
   ·yap,mst1对于RANKL转录调控的调节作用第54页
   ·Western Blot结果第54-55页
   ·RANKL诱导凋亡相关试验第55页
   ·OB细胞分离培养及逆转录病毒感染第55-56页
 4. 讨论第56-63页
   ·骨质疏松和类风湿性关节炎第56-57页
   ·动物模型第57-58页
   ·RANKL/RANK/OPG信号系统第58-59页
   ·诱导凋亡功能第59-60页
   ·细胞内信号转导第60-61页
   ·药物治疗第61-63页
总结第63-64页
参考文献第64-70页
文献综述1 抗体的临床应用及类风湿性关节炎的抗体治疗第70-80页
 文献综述1之参考文献第77-80页
文献综述2 炎症反应信号通路及类风湿性关节炎相关机制第80-93页
 文献综述2之参考文献第89-93页
攻读博士学位期间发表论文第93-94页
致谢第94页

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