| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-13页 |
| 第一章 绪论(LARG蛋白质以及PDZ结构域的研究背景) | 第13-27页 |
| ·引言 | 第13-15页 |
| ·PDZ结构域的简要概述 | 第15-18页 |
| ·LARG PDZ与配体的相互作用 | 第18-23页 |
| ·与plexin B1的相互作用 | 第18-20页 |
| ·与IGF-1受体的相互作用 | 第20页 |
| ·与CD44胞内区域的相互作用 | 第20-23页 |
| 参考文献 | 第23-27页 |
| 第二章 LARG PDZ在自由和复合物状态下的结构研究 | 第27-84页 |
| ·综述-NMR方法研究蛋白质-配体的相互作用 | 第27-37页 |
| ·化学交换的快慢 | 第27-28页 |
| ·蛋白质-小肽之间的相互作用的界面 | 第28页 |
| ·转移NOE | 第28-31页 |
| ·蛋白质-配体分子之间的NOE的检测方法 | 第31-34页 |
| ·NOE抽运 | 第34-35页 |
| ·蛋白质-小肽复合物 | 第35页 |
| ·蛋白质-蛋白质复合物 | 第35-36页 |
| ·总结与展望 | 第36-37页 |
| ·实验材料与方法 | 第37-55页 |
| ·试剂质粒及其来源 | 第37页 |
| ·LARG PDZ目的基因的获得 | 第37-38页 |
| ·质粒构建 | 第38-39页 |
| ·蛋白质的表达和纯化 | 第39-40页 |
| ·蛋白质均一性的检测 | 第40-41页 |
| ·多肽的表达与纯化 | 第41页 |
| ·等温滴定量热实验 | 第41-42页 |
| ·NMR波谱解析三维溶液结构 | 第42-55页 |
| ·实验结果与讨论 | 第55-78页 |
| ·LARG PDZ-pET15b(+)重组质粒构建 | 第55-56页 |
| ·LARG PDZ蛋白质的表达和纯化 | 第56-57页 |
| ·LARG PDZ蛋白质均一的单体形式 | 第57页 |
| ·LARG PDZ自由状态下的溶液结构 | 第57-64页 |
| ·LARG PDZ/plexin B1末端小肽的复合物结构 | 第64-70页 |
| ·LARG PDZ在自由和复合物状态下的结构比较 | 第70-73页 |
| ·LARG PDZ和其它PDZ的构象变化的比较 | 第73-75页 |
| ·LARG PDZ与不同配体的相互作用 | 第75-78页 |
| ·总结 | 第78-80页 |
| 参考文献 | 第80-84页 |
| 第三章 LARG PDZ结构域的动力学性质 | 第84-120页 |
| ·综述-NMR对方法探测生物大分子的动力学性质 | 第84-100页 |
| ·快速时间尺度的内部运动 | 第85-89页 |
| ·慢速时间尺度的内部运动 | 第89-100页 |
| ·蛋白质动力学研究的实验材料和方法 | 第100-103页 |
| ·实验样品的准备 | 第100页 |
| ·主链弛豫实验 | 第100页 |
| ·CPMG实验 | 第100-101页 |
| ·CPMG弛豫扩散分析过程 | 第101页 |
| ·CPMG实验数据的处理过程 | 第101-102页 |
| ·线形分析实验样品准备 | 第102页 |
| ·线形分析步骤 | 第102-103页 |
| ·LARG PDZ动力学实验结果和讨论 | 第103-115页 |
| ·自由和复合物状态下的主链弛豫动力学 | 第103-104页 |
| ·TENSOR2分析 | 第104-105页 |
| ·约化的谱密度函数分析 | 第105-107页 |
| ·自由状态下的LARG PDZ微秒-毫秒动力学的检测 | 第107-110页 |
| ·低小肽浓度下的LARG PDZ微秒-毫秒动力学的检测 | 第110-113页 |
| ·完全饱和状态下的LARG PDZ刚性增强 | 第113页 |
| ·初步的线形分析 | 第113-115页 |
| ·LARG PDZ结构域动力学性质的总结 | 第115-116页 |
| 参考文献 | 第116-120页 |
| 第四章 LARG PDZ结构和动力学关系 | 第120-130页 |
| ·实验材料和方法 | 第120-121页 |
| ·LARG PDZ相关突变体质粒的构建 | 第120-121页 |
| ·LARG PDZ以及突变体蛋白质与配体的相互作用 | 第121页 |
| ·实验结果 | 第121-126页 |
| ·突变体蛋白质的完整性检测 | 第122-124页 |
| ·ITC方法检测蛋白质和小肽之间的相互作用 | 第124-126页 |
| ·讨论 | 第126-129页 |
| 参考文献 | 第129-130页 |
| 第五章 LARG PDZ与plexin B1体内相互作用的探索 | 第130-137页 |
| ·材料和方法 | 第130-134页 |
| ·质粒,试剂,抗体,细胞株来源 | 第130页 |
| ·相关重组质粒的构建 | 第130-131页 |
| ·细胞培养 | 第131页 |
| ·贴壁细胞的传代 | 第131页 |
| ·细胞的冻存(保种) | 第131-132页 |
| ·细胞的冻融(复苏) | 第132页 |
| ·细胞计数板计数法 | 第132页 |
| ·细胞转染 | 第132-133页 |
| ·Western blot步骤 | 第133-134页 |
| ·实验结果和讨论 | 第134-137页 |
| 附录 蛋白质-小肽分子之间的约束 | 第137-141页 |
| 致谢 | 第141-143页 |
| 在读期间发表的学术论文与取得的研究成果 | 第143-145页 |
| 附件 | 第145-146页 |
