重组精氨酸脱亚胺酶的表达、纯化、复性及其生物活性研究
| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 缩略语表 | 第10-11页 |
| 第一章 引言 | 第11-18页 |
| ·实验背景 | 第11-12页 |
| ·精氨酸脱亚胺酶介绍 | 第12-15页 |
| ·常用的氨基酸降解酶 | 第12页 |
| ·精氨酸的作用 | 第12-13页 |
| ·对精氨酸脱亚胺酶的认识 | 第13页 |
| ·精氨酸脱亚胺酶的抗癌机制 | 第13-15页 |
| ·ADI与传统治疗癌症方法的比较 | 第15-16页 |
| ·常用治疗癌症的方法及其不足之处 | 第15-16页 |
| ·ADI做为抗癌药的优点 | 第16页 |
| ·本实验的目的和意义 | 第16-18页 |
| 第二章 材料与方法 | 第18-27页 |
| ·材料与仪器 | 第18-19页 |
| ·实验材料 | 第18页 |
| ·实验仪器 | 第18-19页 |
| ·表达载体的构建 | 第19-22页 |
| ·引物设计 | 第19-20页 |
| ·PCR基因扩增 | 第20页 |
| ·DNA的回收 | 第20页 |
| ·目的DNA与载体连接 | 第20-21页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第21页 |
| ·质粒的转化 | 第21页 |
| ·质粒的提取 | 第21-22页 |
| ·目的DNA与表达载体连接 | 第22页 |
| ·转化 | 第22页 |
| ·重组ADI的表达 | 第22页 |
| ·SDS聚丙烯凝胶电泳分析 | 第22-23页 |
| ·重组ADI的纯化 | 第23-24页 |
| ·包涵体洗涤 | 第23页 |
| ·过柱纯化 | 第23-24页 |
| ·重组ADI的复性 | 第24页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第24-25页 |
| ·重组ADI酶活性检测 | 第25页 |
| ·细胞培养 | 第25-26页 |
| ·抗蛋白酶活性测定 | 第26页 |
| ·重组ADI抗内皮细胞增殖的活性 | 第26页 |
| ·重组ADI抗内皮细胞迁移的活性 | 第26-27页 |
| 第三章 实验结果 | 第27-36页 |
| ·表达载体的构建 | 第27页 |
| ·重组ADI在E.COLI中的表达 | 第27-28页 |
| ·重组ADI的纯化及复性 | 第28-29页 |
| ·重组ADI酶活性测定 | 第29-30页 |
| ·瓜氨酸标准曲线制作 | 第29-30页 |
| ·重组ADI酶活性测定 | 第30页 |
| ·天然ADI和重组ADI抗蛋白酶降解的稳定性 | 第30-32页 |
| ·重组ADI抑制内皮细胞蛋白生长的活性 | 第32-33页 |
| ·重组ADI抑制HEPG2细胞的迁移 | 第33页 |
| ·蛋白浓度测定及回收率计算 | 第33-36页 |
| ·蛋白标准曲线 | 第33-34页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第34-35页 |
| ·蛋白回收率 | 第35-36页 |
| 第四章 实验讨论 | 第36-40页 |
| ·精氨酸脱亚胺酶作用机理 | 第36页 |
| ·重组载体构建以及表达 | 第36-37页 |
| ·包涵体洗涤 | 第37页 |
| ·蛋白的纯化以及复性 | 第37-38页 |
| ·酶蛋白活性测定 | 第38页 |
| ·重组ADI蛋白的稳定性 | 第38-39页 |
| ·重组ADI抗肿瘤细胞活性 | 第39页 |
| ·蛋白回收率及复性率 | 第39-40页 |
| 致谢 | 第40-41页 |
| 参考文献 | 第41-44页 |
| 附录 | 第44-46页 |
