东北林蛙皮肤抗微生物肽真核表达体系构建与抗菌活性研究
| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 缩略语表 | 第6-9页 |
| 1 绪论 | 第9-28页 |
| ·抗微生物肽简介 | 第9-17页 |
| ·抗微生物肽的结构及分类 | 第9-11页 |
| ·抗微生物肽的作用机制 | 第11-14页 |
| ·抗微生物肽的生物表达 | 第14-17页 |
| ·两栖类抗微生物肽的种类、来源及组织学分布 | 第17-18页 |
| ·抗微生物肽的人工制备 | 第18-26页 |
| ·大肠杆菌表达系统 | 第18-20页 |
| ·酵母表达系统 | 第20-23页 |
| ·昆虫细胞表达系统 | 第23-24页 |
| ·哺乳动物表达系统 | 第24-25页 |
| ·其它表达体系 | 第25-26页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第26-28页 |
| 2 材料和方法 | 第28-38页 |
| ·材料 | 第28页 |
| ·酵母菌株、质粒、原核菌株 | 第28页 |
| ·工具酶、主要试剂 | 第28页 |
| ·主要仪器 | 第28页 |
| ·构建抗微生物肽的毕赤酵母表达载体 | 第28-33页 |
| ·设计引物 | 第28-29页 |
| ·重组抗微生物肽基因的制备 | 第29-30页 |
| ·双酶切重组抗微生物肽基因 | 第30-31页 |
| ·连接与转化 | 第31-33页 |
| ·转化毕赤酵母 | 第33-36页 |
| ·重组质粒的大量提取和纯化 | 第33页 |
| ·质粒的线性化 | 第33页 |
| ·酵母感受态细胞的制备 | 第33页 |
| ·转化酵母感受态细胞 | 第33-35页 |
| ·阳性菌落的加压筛选和表型鉴定 | 第35-36页 |
| ·抗微生物肽的表达与检测 | 第36-38页 |
| ·阳性菌株的诱导表达 | 第36页 |
| ·重组表达蛋白的纯化 | 第36页 |
| ·重组表达蛋白的抑菌活性检测 | 第36-38页 |
| 3 结果 | 第38-43页 |
| ·表达载体构建流程 | 第38页 |
| ·PCR 扩增抗微生物肽基因 | 第38-39页 |
| ·阳性重组 pPIC9K | 第39-40页 |
| ·阳性重组毕赤酵母菌株 | 第40页 |
| ·重组酵母株表达条件的初步优化 | 第40-41页 |
| ·重组表达蛋白的抑菌活性检测 | 第41-43页 |
| 4 讨论 | 第43-49页 |
| ·蛋白表达系统的选择 | 第43页 |
| ·表达载体的选择与构建策略 | 第43-44页 |
| ·选择 pPIC9K | 第43-44页 |
| ·插入序列的选择 | 第44页 |
| ·基因选择 | 第44-45页 |
| ·重组酵母的转化与筛选鉴定 | 第45-46页 |
| ·化学转化方法 | 第45页 |
| ·表型筛选 | 第45页 |
| ·G418加压筛选 | 第45-46页 |
| ·重组酵母的诱导表达与纯化 | 第46页 |
| ·对 G~-、G~+菌不同抑杀作用 | 第46-47页 |
| ·协同抑菌作用 | 第47-49页 |
| 结论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-60页 |
| 附录 | 第60-63页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第63-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
