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拟南芥AT14A蛋白的细胞学定位及在介导细胞壁—质膜—细胞骨架连续体中的功能研究

中文摘要第1-9页
英文摘要第9-11页
中英文对照词第11-13页
第1章 文献综述第13-27页
   ·引言第13页
   ·整合素第13-17页
     ·整合素的结构与功能第14-15页
     ·整合素的作用机理第15-16页
     ·整合素介导的信号转导途径第16-17页
   ·植物细胞壁-质膜-细胞骨架连续体的组分结构与功能第17-25页
     ·植物类整合素的研究第17-22页
       ·植物类整合素蛋白的研究进展第17-19页
       ·植物类整合素的定位第19页
       ·植物类整合素蛋白的功能第19-20页
       ·植物类整合素蛋白研究展望第20-21页
       ·拟南芥AT14A的研究现状第21-22页
     ·细胞骨架的结构与功能第22-25页
       ·微管的结构第22-23页
       ·微管的功能第23-24页
       ·微丝的结构第24-25页
       ·微丝的功能第25页
   ·结语第25-27页
第2章 AT14A 缺失型突变体和过表达转基因悬浮细胞系及植株体系的建立第27-38页
   ·引言第27页
   ·材料与方法第27-32页
     ·材料第27-28页
       ·植物材料第28页
       ·质粒与菌株第28页
       ·试剂(盒)第28页
       ·培养基与主要试剂第28页
     ·方法第28-32页
       ·过表达转AT14A基因植株与悬浮细胞体系的建立第28-32页
         ·拟南芥编码AT14A基因的TOPO克隆第28-30页
           ·引物的设计第28-29页
           ·拟南芥叶片总RNA的提取第29页
           ·第一链cDNA的合成第29页
           ·AT14A 序列的PCR 扩增第29页
           ·PCR 产物的回收第29页
           ·目的片段与克隆载体的连接第29页
           ·重组质粒的转化第29页
           ·阳性克隆的PCR 鉴定第29-30页
         ·转AT14A-GFP融合基因的双元载体的构建第30页
           ·重组质粒与表达载体质粒的小量提取第30页
           ·AT14A-GFP 融合基因的双元载体的构建与转化第30页
           ·农杆菌阳性克隆的目的基因序列的PCR 鉴定第30页
           ·农杆菌阳性克隆的 GFP 基因序列的 PCR 鉴定第30页
         ·根癌农杆菌介导法培育转基因拟南芥植株第30-31页
           ·野生型拟南芥植株的培育第30页
           ·根癌农杆菌的培养及其介导的拟南芥转化第30-31页
           ·T1代转AT14A-GFP融合基因拟南芥种子的抗性筛选第31页
           ·转AT14A-GFP融合基因拟南芥植株中总DNA的目的片段与 GFP的PCR鉴定第31页
         ·根癌农杆菌介导法培育转基因拟南芥悬浮细胞第31-32页
           ·转AT14A-GFP基因拟南芥悬浮细胞体系的培育第31页
           ·转AT14A-GFP融合基因拟南芥悬浮细胞中中总DNA的目的片段与GFP的PCR鉴定第31-32页
       ·缺失型突变体at14a悬浮细胞鉴定与培育第32页
   ·结果分析第32-37页
     ·拟南芥叶片总RNA 的提取第32页
     ·拟南芥叶片第一链cDNA 的合成第32-33页
     ·拟南芥AT14A 序列TOPO 克隆的PCR 扩增第33页
     ·转AT14A-GFP融合基因的双元载体的DH5α阳性克隆的PCR鉴定第33-34页
     ·转AT14A-GFP融合基因的双元载体的农杆菌阳性克隆的PCR鉴定第34页
     ·转AT14A-GFP融合基因植株的获得与鉴定第34-35页
       ·转AT14A-GFP 融合基因植株的抗性筛选第34-35页
       ·转AT14A-GFP 融合基因植株的PCR 鉴定第35页
     ·转AT14A-GFP融合基因悬浮细胞的获得与鉴定第35-36页
       ·转AT14A-GFP 融合基因愈伤的筛选第35-36页
       ·转AT14A-GFP融合基因悬浮细胞的PCR鉴定第36页
     ·缺失型突变体at14a悬浮细胞的获得与鉴定第36-37页
   ·讨论第37-38页
第三章 AT14A 的鉴定及定位第38-45页
   ·引言第38页
   ·材料与方法第38-40页
     ·试验材料第38-39页
     ·试验方法第39-40页
       ·细胞总蛋白的提取第39页
       ·细胞膜蛋白的提取第39页
       ·蛋白质浓度测定及SDS-PAGE第39页
       ·Western blot第39-40页
       ·显微镜观察第40页
   ·结果分析第40-45页
     ·拟南芥悬浮细胞中AT14A-GFP 融合蛋白的免疫印迹第40-41页
     ·AT14A-GFP 融合基因GFP 表达的细胞与组织学定位第41-45页
第四章 AT14A 功能的初步研究第45-55页
   ·引言第45-46页
   ·材料与方法第46-47页
     ·试验材料第46页
     ·试验方法第46-47页
       ·细胞形态的观察第46页
       ·细胞骨架蛋白(微管和微丝蛋白)的荧光定位第46-47页
       ·细胞团大小的比较第47页
       ·细胞质壁分离情况的比较第47页
       ·离体叶片失水速率(RWL,Rates of water loss)的测定第47页
   ·结果分析第47-53页
     ·不同基因型悬浮培养细胞的形态差异比较第47-49页
     ·AT14A 蛋白对细胞骨架排列的影响第49-50页
     ·不同基因型悬浮培养细胞间黏附差异比较第50-51页
     ·渗透胁迫条件下不同基因型悬浮培养细胞质壁分离差异比较第51-52页
     ·不同基因型拟南芥离体叶片失水速率差异比较第52-53页
   ·讨论第53-55页
第五章 总结与讨论第55-57页
参考文献第57-64页
附录第64-70页
致谢第70-71页
攻读硕士学位期间发表的论文目录第71-72页

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