| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-13页 |
| 1 绪论 | 第13-41页 |
| ·引言 | 第13-14页 |
| ·基因工程药物研究概况 | 第14-18页 |
| ·利用基因重组技术生产重组多肽和蛋白药物的优点 | 第14页 |
| ·国内外基因工程药物研究现状 | 第14-17页 |
| ·基因工程药物生产的基本过程和基本内容 | 第17页 |
| ·基因工程药物开发过程中，规模要求及放大过程 | 第17-18页 |
| ·基因工程药物开发的关键技术 | 第18-32页 |
| ·重组蛋白的表达 | 第18-20页 |
| ·蛋白质的纯化 | 第20-22页 |
| ·以包涵体形式表达的重组蛋白的复性与纯化 | 第22-30页 |
| ·基因工程药物质量控制 | 第30-32页 |
| ·白介素-1 及其相关受体和受体拮抗剂研究进展 | 第32-38页 |
| ·白介素-1(IL-1) | 第32-33页 |
| ·白介素-1 受体(IL-1R) | 第33页 |
| ·白介素-1 受体拮抗剂(IL-11a) | 第33-34页 |
| ·IL-11a、IL-1 及IL-1R 相互作用关系 | 第34-35页 |
| ·重组IL-11a 的临床应用 | 第35-37页 |
| ·用基因工程的方法生产rhIL-11a 研究概述 | 第37-38页 |
| ·本文的技术路线及主要研究内容 | 第38-39页 |
| ·本研究技术路线图 | 第38页 |
| ·本文的主要研究内容 | 第38-39页 |
| ·本研究的创新点 | 第39-41页 |
| 2 E. COLI/HIL-1RA 表达系统的构建及发酵工艺研究 | 第41-59页 |
| ·引言 | 第41页 |
| ·本章技术路线 | 第41-42页 |
| ·材料与设备 | 第42-43页 |
| ·质粒和菌株 | 第42页 |
| ·主要仪器 | 第42页 |
| ·主要试剂 | 第42-43页 |
| ·试剂配制 | 第43页 |
| ·实验方法 | 第43-49页 |
| ·hIL-11a 全长基因的获得 | 第43页 |
| ·重组质粒pLY-hIL-11a 的构建 | 第43-45页 |
| ·重组菌株pLY-hIL-11a/ BL21 的构建 | 第45-46页 |
| ·重组子的筛选鉴定 | 第46-47页 |
| ·rhIL-11a 高表达菌株的筛选 | 第47页 |
| ·rhIL-11a 在大肠杆菌中的表达条件摸索 | 第47-48页 |
| ·发酵工艺研究 | 第48-49页 |
| ·试验结果 | 第49-57页 |
| ·pLY-hIL-11a 转化BL21 | 第49页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第49-52页 |
| ·huIL-11a 蛋白最佳表达菌株的筛选 | 第52-53页 |
| ·摇瓶培养条件研究 | 第53-54页 |
| ·最佳发酵pH | 第54-55页 |
| ·碳源种类的选择 | 第55-56页 |
| ·pH 调控方式的选择 | 第56页 |
| ·30L 发酵结果 | 第56-57页 |
| ·本章小结 | 第57-59页 |
| 3 IL-1RA 包涵体的制备、洗涤、溶解及稀释复性研究 | 第59-73页 |
| ·引言 | 第59-60页 |
| ·实验材料和仪器 | 第60-61页 |
| ·试剂 | 第60-61页 |
| ·仪器与设备 | 第61页 |
| ·实验方法 | 第61-62页 |
| ·包涵体的释放 | 第61页 |
| ·包涵体的洗涤 | 第61-62页 |
| ·包涵体的溶解 | 第62页 |
| ·包涵体溶液的稀释复性 | 第62页 |
| ·分析方法 | 第62-64页 |
| ·包涵体纯度测定 | 第63页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第63页 |
| ·复性率的计算 | 第63页 |
| ·活性测定 | 第63-64页 |
| ·试验结果 | 第64-71页 |
| ·包涵体的释放 | 第64-65页 |
| ·包涵体的洗涤 | 第65-67页 |
| ·包涵体溶解 | 第67-68页 |
| ·包涵体稀释复性 | 第68-71页 |
| ·本章小结 | 第71-73页 |
| 4 RHIL-1RA 色谱复性及纯化工艺研究 | 第73-99页 |
| ·引言 | 第73-74页 |
| ·试剂与设备 | 第74-75页 |
| ·试剂 | 第74-75页 |
| ·设备 | 第75页 |
| ·实验方法 | 第75-79页 |
| ·色谱法复性吸附条件研究和色谱法复性介质的选择 | 第75-76页 |
| ·阴离子交换层析复性条件研究 | 第76-77页 |
| ·rhIL-11a 纯化条件的优化 | 第77-78页 |
| ·实验室规模的rhIL-11a 复性纯化组分中内毒素去除 | 第78-79页 |
| ·中试规模放大研究 | 第79-82页 |
| ·高压匀浆破壁放大 | 第79-80页 |
| ·包涵体洗涤放大 | 第80页 |
| ·包涵体溶解放大 | 第80页 |
| ·复性与纯化中试工艺放大和工艺条件的确定 | 第80-81页 |
| ·内毒素去除中试条件放大实验 | 第81-82页 |
| ·实验结果 | 第82-96页 |
| ·rhIL-11a 色谱复性介质的选择 | 第82-84页 |
| ·Q-Sepharose Fast Flow 阴离子交换层析复性影响因素研究 | 第84-88页 |
| ·rhIL-11a 复性条件的确定与验证 | 第88-89页 |
| ·rhIL-11a 纯化条件的优化 | 第89-90页 |
| ·实验室规模rhIL-11a 复性并纯化条件验证 | 第90-92页 |
| ·rhIL-11a 复性纯化组分中内毒素去除条件 | 第92页 |
| ·中试规模放大 | 第92-95页 |
| ·内毒素去除中试放大实验 | 第95页 |
| ·中试复性纯化及内毒素去除条件验证 | 第95-96页 |
| ·本章小结 | 第96-99页 |
| 5 RHIL-1RA 下游中试复性纯化原液的质量检定 | 第99-115页 |
| ·引言 | 第99-100页 |
| ·试剂和设备 | 第100-101页 |
| ·试剂与耗材 | 第100-101页 |
| ·设备与仪器 | 第101页 |
| ·实验方法 | 第101-107页 |
| ·理化鉴别实验 | 第101-102页 |
| ·含量、纯度和活性测定 | 第102-104页 |
| ·安全性检测 | 第104-107页 |
| ·原液稳定性实验 | 第107页 |
| ·实验结果 | 第107-114页 |
| ·理化鉴定结果 | 第107-110页 |
| ·含量、纯度、生物活性测定结果 | 第110-112页 |
| ·部分安全性指标检测 | 第112-113页 |
| ·rhIL-1ra 稳定性实验 | 第113-114页 |
| ·结论 | 第114-115页 |
| 6 结论与展望 | 第115-117页 |
| ·全文结论 | 第115页 |
| ·展望 | 第115-117页 |
| 致谢 | 第117-119页 |
| 参考文献 | 第119-129页 |
| 附录 | 第129页 |
| 攻读博士期间发表的论文 | 第129页 |
