| 摘要 | 第1-8页 |
| 1 引言 | 第8-14页 |
| ·昆虫抗菌肽简介 | 第8-10页 |
| ·昆虫抗菌肽的分类 | 第8-9页 |
| ·抗菌肽的作用机制 | 第9-10页 |
| ·果蝇抗菌肽的介绍 | 第10页 |
| ·抗菌肽分子设计 | 第10-11页 |
| ·两亲性和阳离子性原则 | 第11页 |
| ·简化原则 | 第11页 |
| ·需考察的因素 | 第11页 |
| ·毕赤酵母表达系统的概述 | 第11-14页 |
| ·与其他表达系统相比,毕赤酵母菌表达系统具有以下特点 | 第12页 |
| ·密码子偏好 | 第12页 |
| ·宿主菌 | 第12-13页 |
| ·表达载体 | 第13页 |
| ·影响表达的因素 | 第13-14页 |
| 2 抗菌肽的设计及结构分析 | 第14-21页 |
| ·材料 | 第14页 |
| ·分析工具 | 第14-15页 |
| ·方法 | 第15页 |
| ·分析氨基酸序列 | 第15页 |
| ·分析二级结构 | 第15页 |
| ·分析整体的两亲性和疏水性 | 第15页 |
| ·结果 | 第15-21页 |
| ·氨基酸序列的比对 | 第15-16页 |
| ·设计抗菌肽的分析 | 第16-17页 |
| ·设计抗菌肽分子的二级结构分析 | 第17-18页 |
| ·整体两亲性及疏水性预测 | 第18-20页 |
| ·模拟抗菌肽二级结构 | 第20-21页 |
| 3 抗菌肽基因的合成及表达载体pPIC9K-DCA的构建 | 第21-34页 |
| ·实验材料 | 第21-23页 |
| ·菌株及质粒 | 第21页 |
| ·酶及生物试剂 | 第21-22页 |
| ·化学试剂及厂家 | 第22页 |
| ·主要仪器和设备 | 第22页 |
| ·试剂和培养基 | 第22-23页 |
| ·方法步骤 | 第23-29页 |
| ·抗菌肽DCA的基因序列设计 | 第23页 |
| ·抗菌肽DCA的基因序列合成 | 第23-24页 |
| ·PCR产物纯化及回收 | 第24-25页 |
| ·目的片段的PCR产物和载体pPIC9K的限制性内切酶反应 | 第25-27页 |
| ·目的片断的酶切产物和载体pPIC9K酶切产物的连接 | 第27页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第27-28页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌 | 第28页 |
| ·筛选阳性重组子 | 第28-29页 |
| ·结果 | 第29-34页 |
| ·目的片段的合成 | 第29-30页 |
| ·PCR产物纯化和回收 | 第30-31页 |
| ·目的片段和载体的酶切及连接 | 第31-32页 |
| ·筛选阳性重组子 | 第32-34页 |
| 4 重组酵母菌GS115/pPIC9K-DCA的制备及诱导表达 | 第34-47页 |
| ·实验材料 | 第34-36页 |
| ·菌株及质粒 | 第34页 |
| ·酶及生物试剂 | 第34页 |
| ·化学试剂及厂家 | 第34页 |
| ·主要仪器和设备 | 第34页 |
| ·试剂和培养基 | 第34-36页 |
| ·GS115/pPIC9K-DCA的制备及筛选 | 第36-40页 |
| ·制备毕赤酵母GS115感受态细胞 | 第36-37页 |
| ·重组质粒pPIC9K-DCA的线性化 | 第37-38页 |
| ·电转化 | 第38页 |
| ·初筛 | 第38-39页 |
| ·复筛 | 第39-40页 |
| ·Mut表型的鉴定 | 第40页 |
| ·重组酵母菌的诱导及表达产物的检测 | 第40-43页 |
| ·His~+Mut~+表型重组酵母的诱导 | 第40页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第40-41页 |
| ·表达产物的浓缩 | 第41页 |
| ·Tricine-SDS-PAGE电泳 | 第41-42页 |
| ·表达产物的体外抑菌活性实验 | 第42-43页 |
| ·结果 | 第43-47页 |
| ·质粒线性化结果 | 第43页 |
| ·酵母重组子的的筛选 | 第43-45页 |
| ·重组酵母菌的诱导表达及检测 | 第45-46页 |
| ·表达量的测定 | 第46页 |
| ·抑菌活性的检测 | 第46-47页 |
| 5 小结与讨论 | 第47-50页 |
| ·多肽的设计 | 第47-48页 |
| ·抗菌肽的合成 | 第48页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第48-49页 |
| ·酵母菌的转化、诱导和表达 | 第49-50页 |
| 6 结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-56页 |
| 附录 | 第56-58页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第58-59页 |
| 作者简介 | 第59-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 附发表文章 | 第61-65页 |
