| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 缩略语表 | 第11-12页 |
| 第一章 前言 | 第12-21页 |
| 1 猪2型链球菌的血清型 | 第12页 |
| 2 猪2型链球菌的毒力因子 | 第12-14页 |
| ·荚膜多糖 | 第12-13页 |
| ·溶菌酶释放蛋白和胞外蛋白因子 | 第13页 |
| ·溶血素 | 第13-14页 |
| ·黏附素 | 第14页 |
| ·IgG结合蛋白 | 第14页 |
| 3 猪2型链球菌病流行病学 | 第14-21页 |
| ·病原特性 | 第14-15页 |
| ·流行病学特性 | 第15-21页 |
| ·感染猪的流行病学特性 | 第15-16页 |
| ·感染人的流行病学特性 | 第16-17页 |
| ·临床症状与病理变化 | 第17页 |
| ·致病机理 | 第17-18页 |
| ·猪2型链球菌的检测方法 | 第18-19页 |
| ·免疫预防 | 第19-21页 |
| 第二章 猪2型链球菌间接ELISA试剂盒研制及应用 | 第21-53页 |
| 1 研究目的与意义 | 第21页 |
| 2 试验材料 | 第21-23页 |
| ·菌种 | 第21页 |
| ·血清及酶标二抗 | 第21-22页 |
| ·ELISA主要试剂 | 第22页 |
| ·ELISA相关溶液的配制 | 第22-23页 |
| 3 方法 | 第23-27页 |
| ·荚膜多糖的制备及定量 | 第23-24页 |
| ·荚膜多糖的制备 | 第23页 |
| ·苯酚-硫酸法测荚膜多糖浓度 | 第23-24页 |
| ·抗原最佳包被浓度和血清最佳稀释度的确定 | 第24页 |
| ·封闭液的确定 | 第24页 |
| ·血清稀释液的确定 | 第24页 |
| ·血清最佳反应时间的确定 | 第24页 |
| ·酶标抗体反应时间的确定 | 第24-25页 |
| ·底物的最佳反应时间的确定 | 第25页 |
| ·ELISA操作程序 | 第25页 |
| ·敏感性试验 | 第25页 |
| ·特异性试验 | 第25-26页 |
| ·重复性试验 | 第26页 |
| ·批内可重复性试验 | 第26页 |
| ·批间可重复性试验 | 第26页 |
| ·保存期试验 | 第26-27页 |
| ·性状检验 | 第26页 |
| ·敏感性检验 | 第26页 |
| ·特异性检验 | 第26-27页 |
| ·破坏性试验 | 第27页 |
| ·血清稀释液破坏性试验 | 第27页 |
| ·ELISA反应板的破坏性试验 | 第27页 |
| ·ELISA判定标准的确定 | 第27页 |
| 4 结果与分析 | 第27-49页 |
| ·荚膜多糖的浓度 | 第27-28页 |
| ·抗原最佳包被浓度和血清最佳稀释度的确定 | 第28-29页 |
| ·封闭液的确定 | 第29-30页 |
| ·血清稀释液的确定 | 第30页 |
| ·血清最佳反应时间的确定 | 第30页 |
| ·酶标抗体反应时间的确定 | 第30-31页 |
| ·底物的最佳反应时间的确定 | 第31页 |
| ·敏感性试验 | 第31-33页 |
| ·特异性试验 | 第33-34页 |
| ·重复性试验 | 第34-37页 |
| ·批内可重复性试验 | 第34-36页 |
| ·批间可重复性试 | 第36-37页 |
| ·保存期试验 | 第37-43页 |
| ·性状检验 | 第37-38页 |
| ·敏感性检测 | 第38-39页 |
| ·特异性检验 | 第39-43页 |
| ·破坏性试验 | 第43-44页 |
| ·血清稀释液坏性试验结果 | 第43页 |
| ·反应板破坏性试验结果 | 第43-44页 |
| ·ELISA判定标准的确定结果 | 第44-45页 |
| ·流行病学调查与分析验证 | 第45-49页 |
| ·流行病学调查 | 第45-47页 |
| ·分析与验证 | 第47-49页 |
| 5 讨论 | 第49-53页 |
| ·猪2型链球菌 | 第49页 |
| ·酶联免疫吸附试验(ELISA) | 第49-51页 |
| ·试剂的选择 | 第49-50页 |
| ·酶标板的选择 | 第50页 |
| ·ELISA方法的判断标准 | 第50-51页 |
| ·ELISA方法的优点和缺点 | 第51页 |
| ·小结 | 第51-53页 |
| 第三章 猪链球菌间接血凝试验方法建立及应用 | 第53-68页 |
| 1 研究目的与意义 | 第53页 |
| 2 试验材料 | 第53-56页 |
| ·菌种及质粒 | 第53页 |
| ·血清 | 第53-54页 |
| ·主要药品及试剂 | 第54页 |
| ·主要试剂及溶液的配制 | 第54-56页 |
| ·抗生素类 | 第54页 |
| ·细菌培养基 | 第54页 |
| ·质粒抽提 | 第54页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)缓冲液 | 第54-55页 |
| ·Western blot缓冲液 | 第55页 |
| ·其它缓冲液 | 第55-56页 |
| 3 试验方法 | 第56-60页 |
| ·SLY基因的扩增表达 | 第56-59页 |
| ·引物设计 | 第56页 |
| ·PCR产物的回收与纯化 | 第56页 |
| ·SLY基因的克隆及测序 | 第56页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第56-57页 |
| ·连接产物及质粒的转化 | 第57页 |
| ·质粒的制备(碱裂解法) | 第57页 |
| ·诱导表达 | 第57-58页 |
| ·包涵体提取 | 第58页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第58页 |
| ·Western-blot | 第58-59页 |
| ·红细胞的制备 | 第59页 |
| ·抗原致敏 | 第59页 |
| ·间接血凝试验 | 第59-60页 |
| 4 结果 | 第60-66页 |
| ·SLY基因的PCR扩增、克隆及序列测定 | 第60-63页 |
| ·SLY表达载体的构建与鉴定 | 第63页 |
| ·SLY表达产物的SDS-PAGE及 Western-blot结果 | 第63-64页 |
| ·间接血凝最佳工作条件的确定 | 第64-65页 |
| ·抗原最佳浓度确定 | 第64-65页 |
| ·抗原致敏时间和结果判定最佳时间的选择 | 第65页 |
| ·结果判定最佳时间的选择 | 第65页 |
| ·试验结果的判断标准 | 第65页 |
| ·分析 | 第65-66页 |
| 5 讨论 | 第66-68页 |
| ·间接血凝试验 | 第66-67页 |
| ·间接血凝试验优点 | 第67页 |
| ·小结 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-72页 |
| 致谢 | 第72页 |
