| 中文摘要 | 第1-5页 |
| 英文摘要 | 第5-11页 |
| 专业名词缩写中英文对照表 | 第11-12页 |
| 前言 | 第12-16页 |
| 实验技术路线图 | 第16-18页 |
| (一) 材料与方法 | 第18-40页 |
| 1.pT2BH-LacZ的构建 | 第18-23页 |
| ·材料和试剂 | 第18-19页 |
| ·主要仪器 | 第19页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备 | 第19-20页 |
| ·酶切 | 第20-21页 |
| ·切胶回收转座子载体片段与CMV-LacZ片段 | 第21页 |
| ·连接 | 第21-22页 |
| ·转化抽提 | 第22页 |
| ·质粒的抽提 | 第22-23页 |
| ·酶切检验 | 第23页 |
| 2.pT2BH-H2-K~b的构建 | 第23-25页 |
| ·材料和试剂 | 第24页 |
| ·主要仪器 | 第24页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备 | 第24页 |
| ·酶切 | 第24-25页 |
| ·切胶回收转座子载体片段与RIP-H2-K~b片段 | 第25页 |
| ·连接 | 第25页 |
| ·转化抽提 | 第25页 |
| ·质粒的抽提 | 第25页 |
| ·酶切检验 | 第25页 |
| 3.细胞转染 | 第25-29页 |
| ·材料和试剂 | 第25-26页 |
| ·主要仪器 | 第26页 |
| ·主要试剂的配制 | 第26页 |
| ·细胞株的解冻 | 第26-27页 |
| ·细胞传代 | 第27页 |
| ·细胞计数 | 第27-28页 |
| ·细胞株的冻存 | 第28页 |
| ·细胞转染 | 第28-29页 |
| 4.尾静脉注射 | 第29-30页 |
| ·材料和试剂 | 第29-30页 |
| ·主要仪器 | 第30页 |
| ·注射试剂的配制 | 第30页 |
| ·注射方法 | 第30页 |
| 5.LacZ染色方法 | 第30-32页 |
| ·材料和试剂 | 第30页 |
| ·主要仪器 | 第30页 |
| ·主要试剂的配制 | 第30-32页 |
| ·细胞染色步骤 | 第32页 |
| ·组织染色步骤 | 第32页 |
| 6.注射pT2BH-LacZ后阳性小鼠的检测 | 第32-34页 |
| ·材料和试剂 | 第32页 |
| ·主要仪器 | 第32页 |
| ·组织切片 | 第32页 |
| ·鼠尾gDNA的抽提 | 第32-33页 |
| ·H/E染色 | 第33-34页 |
| 7.注射pT2BH-H2-K~b后阳性小鼠的检测 | 第34-40页 |
| ·材料和试剂 | 第34页 |
| ·主要仪器 | 第34页 |
| ·血糖检测 | 第34页 |
| ·尿糖检测 | 第34-35页 |
| ·眼眶静脉丛取血 | 第35页 |
| ·血胰岛素的检测 | 第35页 |
| ·鼠尾gDNA的抽提 | 第35页 |
| ·PCR筛选 | 第35-36页 |
| ·脉冲场电泳 | 第36页 |
| ·狭缝杂交 | 第36-38页 |
| ·组织病理切片 | 第38页 |
| ·组织RNA的抽提 | 第38-39页 |
| ·RNA的逆转录 | 第39-40页 |
| (二) 实验结果 | 第40-52页 |
| 1 SB转座系统质粒的扩增 | 第40-41页 |
| ·pT2BH与pT2HB质粒酶切结果 | 第40页 |
| ·pCMV-SB10与pCMV-SB11质粒酶切结果 | 第40-41页 |
| 2 pT2BH-LacZ质粒构建结果 | 第41-42页 |
| ·测序结果 | 第41页 |
| ·酶切检验结果 | 第41-42页 |
| 3 pT2BH-H2-K~b质粒构建结果 | 第42页 |
| ·测序结果 | 第42页 |
| ·酶切检验结果 | 第42页 |
| 4 pT2BH-LacZ质粒细胞转染结果 | 第42-44页 |
| ·pT2BH-LacZ质粒转染HELA细胞结果 | 第42-43页 |
| ·pT2BH-LacZ质粒转染MCF-7细胞结果 | 第43-44页 |
| 5 pT2BH-LacZ质粒显微注射结果 | 第44-45页 |
| ·染色结果 | 第44-45页 |
| 6 pT2BH-LacZ质粒鼠尾静脉注射结果 | 第45-46页 |
| ·染色结果 | 第45-46页 |
| 7 pT2BH-H2-K~b质粒鼠尾静脉注射结果 | 第46-52页 |
| ·体重监测结果 | 第46-47页 |
| ·血糖监测结果 | 第47页 |
| ·尿糖检测结果 | 第47-48页 |
| ·血胰岛素检测结果 | 第48页 |
| ·PCR检测结果 | 第48-50页 |
| ·Slot Bloting结果 | 第50页 |
| ·组织病理切片结果 | 第50-52页 |
| (三) 讨论 | 第52-53页 |
| (四) 结论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-57页 |
| 综述 | 第57-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 个人简历 | 第66页 |