丁香假单胞菌番茄变种DC3000HrpA蛋白单链抗体的制备与分析
| 摘要 | 第1-8页 |
| 英文摘要 | 第8-9页 |
| 1 前言 | 第9-10页 |
| 2 文献综述 | 第10-21页 |
| ·植物病原细菌hrp基因 | 第10-15页 |
| ·抗体工程 | 第15-21页 |
| 3 材料与方法 | 第21-33页 |
| ·材料 | 第21-24页 |
| ·细胞及细胞株 | 第21-22页 |
| ·质粒载体 | 第22页 |
| ·PCR引物 | 第22-23页 |
| ·试剂与材料 | 第23页 |
| ·仪器 | 第23-24页 |
| ·实验方法 | 第24-33页 |
| ·用于杂交瘤细胞性质鉴定及淘选用蛋白的制备 | 第24-25页 |
| ·杂交瘤细胞的制备 | 第25页 |
| ·单克隆抗体的型及亚类鉴定 | 第25页 |
| ·单克隆抗体亲和常数的测定 | 第25-26页 |
| ·杂交瘤细胞的制备及RNA提取 | 第26-27页 |
| ·cDNA的合成 | 第27页 |
| ·重、轻链可变区基因的PCR扩增 | 第27-28页 |
| ·scFv片段的组装 | 第28-29页 |
| ·pCANTAB 5E-scFv重组质粒的构建 | 第29-30页 |
| ·电转感受态菌TG1的制备 | 第30页 |
| ·scfv单链抗体噬菌体库的构建 | 第30-31页 |
| ·单链噬菌体抗体库的富集筛选 | 第31-32页 |
| ·scFv单链抗体融合表达和可溶性表达 | 第32页 |
| ·ELISA检测HrpA特异性的单链抗体 | 第32-33页 |
| 4 结果与分析 | 第33-40页 |
| ·淘洗用蛋白HrpA的制备 | 第33页 |
| ·HrpA单克隆抗体类型及亚类的鉴定 | 第33页 |
| ·HrpA单克隆抗体亲和力常数的测定 | 第33-34页 |
| ·VH和VL的获得 | 第34-35页 |
| ·Scfv DNA的组装和扩增 | 第35页 |
| ·噬菌体抗体库的构建及噬菌体展示 | 第35-37页 |
| ·Scfv特异性鉴定 | 第37-38页 |
| ·ELISA检测鉴定 | 第37页 |
| ·可溶性表达 | 第37-38页 |
| ·scFv的PCR验证 | 第38-39页 |
| ·测序 | 第39-40页 |
| 5 小结与讨论 | 第40-43页 |
| ·杂交瘤细胞的复苏培养 | 第40页 |
| ·杂交瘤细胞RNA的提取 | 第40-41页 |
| ·噬菌体抗体库的构建 | 第41页 |
| ·噬菌体表达载体 | 第41页 |
| ·抗体库的淘选 | 第41-42页 |
| ·测序 | 第42页 |
| ·应用前景 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-48页 |
| 附录 | 第48-55页 |
| 致谢 | 第55页 |
