| 第一章：拮抗链霉菌几丁质酶基因分子探测 | 第1-35页 |
| 1 引言 | 第12-15页 |
| 2 材料与方法 | 第15-21页 |
| ·材料 | 第15-17页 |
| ·菌株 | 第15页 |
| ·培养基 | 第15-16页 |
| ·试剂 | 第16-17页 |
| ·主要仪器 | 第17页 |
| ·方法 | 第17-21页 |
| ·链霉菌菌株的分离 | 第17页 |
| ·拮抗链霉菌菌株的筛选 | 第17-18页 |
| ·链霉菌菌株的保藏 | 第18页 |
| ·产几丁质酶菌株的筛选 | 第18页 |
| ·链霉菌DNA提取方法 | 第18-19页 |
| ·几丁质酶基因保守引物设计、合成和扩增 | 第19页 |
| ·PCR扩增测序 | 第19-20页 |
| ·PCR扩增片段的BLAST分析 | 第20-21页 |
| 3 结果与分析 | 第21-31页 |
| ·拮抗链霉菌分离 | 第21页 |
| ·拮抗链霉菌菌株的几丁质酶活性测定 | 第21-22页 |
| ·快速提取链霉菌DNA的方法 | 第22-24页 |
| ·几丁质酶基因保守引物设计 | 第24-26页 |
| ·几丁质酶基因的PCR探测 | 第26-27页 |
| ·PCR产物序列分析 | 第27-31页 |
| ·Men-myco-93-63菌株PCR产物序列分析 | 第28-29页 |
| ·S93菌株PCR产物序列分析 | 第29-31页 |
| 4 讨论 | 第31-34页 |
| ·拮抗链霉菌菌株的筛选 | 第31页 |
| ·产几丁质酶生防链霉菌菌株的筛选 | 第31-32页 |
| ·几丁质酶的PCR检测 | 第32-34页 |
| 5 结论 | 第34-35页 |
| 第二章 玫瑰黄链霉菌Men-myco-93-63几丁质酶基因ChiC的克隆及原核表达 | 第35-59页 |
| 1 引言 | 第35-37页 |
| 2 材料与方法 | 第37-45页 |
| ·材料 | 第37-39页 |
| ·菌株与质粒 | 第37页 |
| ·培养基 | 第37-38页 |
| ·试剂与酶 | 第38-39页 |
| ·主要仪器 | 第39页 |
| ·方法 | 第39-45页 |
| ·链霉菌孢子悬液的制备 | 第39页 |
| ·链霉菌DNA提取： | 第39-40页 |
| ·Men-myco-93-63几丁质酶基因ChiC催化域的扩增 | 第40页 |
| ·Men-myco-93-63几丁质酶基因ChiC催化域的克隆 | 第40-41页 |
| ·E.coli质粒DNA小量提取 | 第41页 |
| ·E.coli质粒DNA大量提取 | 第41页 |
| ·限制酶切反应 | 第41-42页 |
| ·去磷酸化反应 | 第42页 |
| ·DNA连接反应 | 第42页 |
| ·E.coli感受态细胞的制备 | 第42页 |
| ·质粒DNA转化E.coli | 第42页 |
| ·E.coli转化子的快速鉴定 | 第42页 |
| ·Men-myco-93-63 ChiC基因的表达及活性检测 | 第42-45页 |
| 3 结果与分析 | 第45-56页 |
| ·Men-myco-93-63几丁质酶基因ChiC催化域的克隆和表达 | 第45-49页 |
| ·Men-myco-93-63几丁质酶基因ChiC催化域的克隆 | 第45-47页 |
| ·表达载体的构建 | 第47-48页 |
| ·SDS-PAGE分析 | 第48-49页 |
| ·几丁质酶活性测定 | 第49页 |
| ·Men-myco-93-63几丁质酶基因ChiC拼接后表达 | 第49-56页 |
| ·几丁质酶基因ChiC催化域PCR扩增 | 第49-50页 |
| ·几丁质酶前端序列的PCR扩增 | 第50页 |
| ·表达载体的构建 | 第50-53页 |
| ·SDS-PAGE分析 | 第53-54页 |
| ·几丁质酶活性测定 | 第54-56页 |
| 4 讨论 | 第56-58页 |
| ·几丁质酶催化域的克隆及E.coli表达 | 第56页 |
| ·几丁质酶基因拼接表达 | 第56-58页 |
| 5 结论 | 第58-59页 |
| 第三章 玫瑰黄链霉菌Men-myco-93-63抗生素生物合成基因簇的初步研究 | 第59-89页 |
| 1 引言 | 第59-62页 |
| 2 材料与方法 | 第62-71页 |
| ·材料 | 第62-65页 |
| ·菌株与质粒 | 第62页 |
| ·培养基 | 第62-63页 |
| ·试剂 | 第63-65页 |
| ·主要仪器 | 第65页 |
| ·方法 | 第65-71页 |
| ·链霉菌孢子悬浮液的制备 | 第65页 |
| ·链霉菌DNA提取： | 第65页 |
| ·E.coli质粒DNA提取 | 第65页 |
| ·E.coli感受态细胞的制备 | 第65-66页 |
| ·质粒酶切、去磷酸化、连接 | 第66页 |
| ·总DNA的Sau3AI不完全酶切 | 第66页 |
| ·蔗糖浓度梯度离心 | 第66-67页 |
| ·噬菌外壳蛋白包装 | 第67页 |
| ·E.coli LE392感受态细胞制备 | 第67页 |
| ·噬菌体转导 | 第67页 |
| ·挑选转化子 | 第67页 |
| ·文库的筛选 | 第67页 |
| ·Southem印迹杂交 | 第67-69页 |
| ·链霉菌质粒提取 | 第69页 |
| ·链霉菌的原生质体制备，转化及再生程序 | 第69-70页 |
| ·转化子活性检测 | 第70页 |
| ·抗性检测 | 第70-71页 |
| 3 结果与分析 | 第71-85页 |
| ·玫瑰黄链霉菌Men-myco-93-63基因文库的建立 | 第71-73页 |
| ·总DNA的Sau3AI不完全酶切 | 第71页 |
| ·DNA片段的蔗糖梯度离心 | 第71-72页 |
| ·质粒载体pKC505的处理 | 第72页 |
| ·载体与外源片段的连接、包装及侵染 | 第72页 |
| ·文库质量分析 | 第72-73页 |
| ·鸟枪法克隆抗生素合成基因簇 | 第73页 |
| ·探针的获得 | 第73-77页 |
| ·PKS类引物的合成和扩增 | 第73-75页 |
| ·糖苷类引物的合成和扩增 | 第75-76页 |
| ·NRPS类引物的合成和扩增 | 第76页 |
| ·抗生素抗性基因引物的合成和扩增 | 第76-77页 |
| ·玫瑰黄链霉菌Men-myco-93-63β-内酰胺酶基因的克隆 | 第77-85页 |
| ·质粒文库的构建 | 第77-79页 |
| ·文库筛选 | 第79-85页 |
| 4 讨论 | 第85-88页 |
| 5 结论 | 第88-89页 |
| 全文结论 | 第89-95页 |
| 参考文献 | 第95-106页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第106-107页 |
| 作者简历 | 第107-122页 |
| 致谢 | 第122页 |
