| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 1 前言 | 第10-20页 |
| ·抑肌素基因 | 第10-13页 |
| ·抑肌素基因的发现 | 第10-11页 |
| ·Myostatin 基因的结构 | 第11页 |
| ·Myostatin 基因的生物学功能 | 第11-12页 |
| ·Myostatin 基因的应用前景 | 第12-13页 |
| ·RNA 干涉 | 第13-16页 |
| ·RNA 干涉现象的发现 | 第13页 |
| ·RNAi 的一般机制 | 第13页 |
| ·哺乳动物的RNAi 机制 | 第13-14页 |
| ·在哺乳动物中应用RNAi 技术的主要策略 | 第14-16页 |
| ·RNAi 技术的应用前景 | 第16页 |
| ·哺乳动物细胞培养的研究进展 | 第16-19页 |
| ·动物细胞培养的发展简史 | 第16-17页 |
| ·动物细胞培养方法 | 第17-18页 |
| ·骨骼肌细胞 | 第18-19页 |
| ·成纤维细胞 | 第19页 |
| ·研究的内容和目的 | 第19-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-36页 |
| ·实验动物 | 第20页 |
| ·主要材料和试剂 | 第20-23页 |
| ·主要器材 | 第20-21页 |
| ·主要药品及配制 | 第21-23页 |
| ·实验方法 | 第23-36页 |
| ·细胞体外培养体系的建立 | 第23-25页 |
| ·shRNA 表达载体的构建 | 第25-28页 |
| ·shRNA 表达载体转染猪体细胞 | 第28-31页 |
| ·RNA 干涉效果的检测 | 第31-36页 |
| 3 结果与分析 | 第36-53页 |
| ·细胞培养的结果 | 第36-40页 |
| ·猪骨骼肌卫星细胞的培养 | 第36-37页 |
| ·胎儿成纤维细胞的培养 | 第37-38页 |
| ·细胞的冻存和复苏 | 第38-40页 |
| ·干涉序列的设计结果 | 第40-42页 |
| ·质粒的鉴定结果 | 第42-44页 |
| ·重组质粒 | 第42-43页 |
| ·绿色荧光蛋白质粒 | 第43-44页 |
| ·转染的结果 | 第44-46页 |
| ·G418 筛选浓度的选择结果 | 第44-45页 |
| ·pECFP-c1 对转染体系选择的结果 | 第45-46页 |
| ·在mRNA 水平检测干扰结果 | 第46-53页 |
| ·提取RNA 的检测结果 | 第46页 |
| ·PCR 循环参数的设定 | 第46-47页 |
| ·RT-PCR 的结果 | 第47-53页 |
| 4 讨论 | 第53-58页 |
| ·细胞培养的体系和方法 | 第53页 |
| ·细胞的分离纯化 | 第53-54页 |
| ·G418 筛选浓度的选择 | 第54页 |
| ·shRNA 的设计的原则 | 第54-55页 |
| ·转染的效率 | 第55-56页 |
| ·基因m RNA 表达水平的测定 | 第56页 |
| ·不同细胞对RNA 干涉myostatin 基因表达的影响 | 第56-58页 |
| 5 结论 | 第58-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-63页 |
| Appendix | 第63-65页 |
| 攻读学位期间发表论文 | 第65页 |