| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-11页 |
| 插图和附表清单 | 第11-12页 |
| 缩略表 | 第12-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-21页 |
| ·猴嗜T淋巴白血病病毒STLV概况 | 第13-17页 |
| ·STLV病毒学特点 | 第13-14页 |
| ·STLV的类型和生物学特点 | 第14-15页 |
| ·STLV的传播途径和流行概况 | 第15-16页 |
| ·STLV检测技术研究进展 | 第16-17页 |
| ·昆虫杆状病毒表达系统概况 | 第17-19页 |
| ·研究目的和意义 | 第19-21页 |
| 第二章 STLV病毒gag基因杆状病毒表达载体的构建 | 第21-35页 |
| ·引言 | 第21页 |
| ·材料与方法 | 第21-23页 |
| ·质粒和菌种 | 第21页 |
| ·主要试剂 | 第21-22页 |
| ·主要仪器 | 第22-23页 |
| ·技术路线 | 第23页 |
| ·实验方法 | 第23-31页 |
| ·引物 | 第23-24页 |
| ·PCR反应扩增目的基因 | 第24-25页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第25-26页 |
| ·克隆载体PMD19-T-gag的构建 | 第26-28页 |
| ·重组表达质粒pFastBacHTB-gag的构建及鉴定 | 第28-29页 |
| ·重组杆粒Bacmid-gag的构建 | 第29-31页 |
| ·结果与分析 | 第31-33页 |
| ·重组质粒pFastBacHTB-gag的构建 | 第31-32页 |
| ·重组杆粒Bacmid-gag的PCR鉴定 | 第32页 |
| ·杆状病毒表达载体Bacmid-gag的浓度 | 第32-33页 |
| ·小结 | 第33页 |
| ·讨论 | 第33-35页 |
| ·载体的构建 | 第33页 |
| ·阳性对照的建立 | 第33-35页 |
| 第三章 Gag蛋白在sf9昆虫细胞中的表达及纯化 | 第35-49页 |
| ·引言 | 第35页 |
| ·材料与方法 | 第35-39页 |
| ·主要试剂 | 第35-39页 |
| ·主要仪器 | 第39页 |
| ·实验方法 | 第39-43页 |
| ·sf9细胞培养 | 第39-40页 |
| ·杆状病毒对sf9昆虫细胞的转染 | 第40页 |
| ·重组蛋白的表达 | 第40-41页 |
| ·重组蛋白的检测及鉴定 | 第41页 |
| ·表达产物的纯化及鉴定 | 第41-43页 |
| ·结果与分析 | 第43-46页 |
| ·细胞转染结果 | 第43-44页 |
| ·重组蛋白的SDS-PAGE分析 | 第44-45页 |
| ·重组蛋白的Western blot鉴定 | 第45-46页 |
| ·纯化后蛋白浓度的测定 | 第46页 |
| ·小结 | 第46页 |
| ·讨论 | 第46-49页 |
| ·昆虫细胞培养注意事项 | 第46页 |
| ·昆虫细胞转染 | 第46-47页 |
| ·重组蛋白的表达 | 第47-48页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第48-49页 |
| 第四章 STLV-1间接ELISA方法的建立及应用 | 第49-65页 |
| ·引言 | 第49页 |
| ·材料 | 第49-50页 |
| ·抗原 | 第49页 |
| ·血清和酶标抗体 | 第49页 |
| ·ELISA相关溶液 | 第49-50页 |
| ·主要仪器 | 第50页 |
| ·实验方法 | 第50-53页 |
| ·间接ELISA操作步骤 | 第50-51页 |
| ·抗原浓度和血清稀释度的确定 | 第51页 |
| ·最佳封闭液的确定 | 第51页 |
| ·最佳封闭时间的确定 | 第51-52页 |
| ·血清反应时间的确定 | 第52页 |
| ·酶标二抗工作浓度的确定 | 第52页 |
| ·最佳酶标二抗作用时间 | 第52页 |
| ·间接ELISA实验结果判定标准 | 第52页 |
| ·与商品化试剂盒的符合率检测 | 第52页 |
| ·间接ELISA方法的特异性评价 | 第52-53页 |
| ·间接ELISA方法的批内、批间重复性的评价 | 第53页 |
| ·结果与分析 | 第53-62页 |
| ·最佳抗原包被浓度和血清稀释度 | 第53-54页 |
| ·最佳封闭液的确定 | 第54-55页 |
| ·最佳封闭时间的确定 | 第55-56页 |
| ·一抗最佳作用时间 | 第56-57页 |
| ·酶标二抗最佳工作浓度 | 第57-58页 |
| ·酶标二抗最佳作用时间 | 第58-59页 |
| ·间接ELISA判定标准的确定 | 第59-60页 |
| ·与商品化试剂盒的符合率评价 | 第60页 |
| ·特异性评价 | 第60-61页 |
| ·批间及批内重复性实验检测结果 | 第61-62页 |
| ·小结 | 第62页 |
| ·讨论 | 第62-65页 |
| 第五章 杂交瘤细胞的制备 | 第65-75页 |
| ·引言 | 第65页 |
| ·材料 | 第65-66页 |
| ·抗原 | 第65页 |
| ·实验动物与细胞 | 第65页 |
| ·主要试剂 | 第65-66页 |
| ·主要仪器 | 第66页 |
| ·实验方法 | 第66-70页 |
| ·动物免疫 | 第66页 |
| ·骨髓瘤细胞的制备 | 第66页 |
| ·饲养细胞的制备 | 第66-67页 |
| ·脾细胞制备 | 第67页 |
| ·细胞融合 | 第67-68页 |
| ·融合细胞的培养 | 第68页 |
| ·杂交细胞的筛选 | 第68-69页 |
| ·杂交瘤细胞的克隆化培养 | 第69页 |
| ·杂交瘤细胞的扩大培养 | 第69页 |
| ·杂交瘤细胞的冻存 | 第69-70页 |
| ·结果与分析 | 第70-72页 |
| ·SP2/O细胞培养结果 | 第70页 |
| ·阳性杂交瘤细胞的筛选 | 第70页 |
| ·杂交瘤细胞株克隆化结果 | 第70-72页 |
| ·小结 | 第72页 |
| ·讨论 | 第72-75页 |
| ·动物免疫 | 第72-73页 |
| ·细胞的融合 | 第73页 |
| ·杂交瘤细胞的筛选 | 第73-74页 |
| ·杂交瘤细胞克隆化 | 第74-75页 |
| 第六章 总结与展望 | 第75-77页 |
| ·本研究小结 | 第75页 |
| ·工作展望 | 第75-77页 |
| 致谢 | 第77-79页 |
| 参考文献 | 第79-87页 |
| 附录A 攻读硕士期间发表论文目录 | 第87-88页 |
| 附录B STLV-1 gag基因序列 | 第88-89页 |
| 附录C PFastBacTM-HTB载体克隆位点图 | 第89页 |
