| 中文摘要 | 第1-7页 |
| 英文摘要 | 第7-14页 |
| 1 文献综述 | 第14-38页 |
| ·人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(hGM-CSF) | 第14-21页 |
| ·hGM-CSF的结构特点及生物学活性 | 第14-17页 |
| ·hGM-CSF的结构和理化性质 | 第14-16页 |
| ·hGM-CSF的生物学活性 | 第16-17页 |
| ·hGM-CSF的临床应用 | 第17页 |
| ·hGM-CSF的研究进展 | 第17-21页 |
| ·hGM-CSF的表达体系 | 第18-19页 |
| ·hGM-CSF表达水平的调控 | 第19-21页 |
| ·蓝藻基因工程 | 第21-34页 |
| ·蓝藻基因组概述 | 第22-24页 |
| ·蓝藻基因工程载体 | 第24-26页 |
| ·穿梭表达载体 | 第24-25页 |
| ·整合载体和转座子 | 第25页 |
| ·噬菌体载体 | 第25-26页 |
| ·同源重组法在蓝藻中表达外源基因 | 第26-28页 |
| ·同源重组的形式 | 第26-27页 |
| ·整合载体 | 第27-28页 |
| ·同源重组法在蓝藻中表达外源基因的优势与不足 | 第28页 |
| ·蓝藻外源基因的转化方法 | 第28-30页 |
| ·遗传转化 | 第29页 |
| ·接合转移 | 第29-30页 |
| ·蓝藻中外源基因的表达调控 | 第30-32页 |
| ·转录水平的调控 | 第30-31页 |
| ·翻译水平的调控 | 第31-32页 |
| 1) SD序列 | 第31页 |
| 2) 起始密码子 | 第31页 |
| 3) 宿主对遗传密码的偏爱性 | 第31-32页 |
| ·蓝藻表达外源基因的研究进展 | 第32页 |
| ·选择蓝藻作为宿主表达外源基因的原因 | 第32-34页 |
| ·蓝藻作为宿主表达外源基因的优势 | 第32-34页 |
| ·蓝藻作为宿主表达外源基因的不足 | 第34页 |
| ·本实验的研究内容、目的与意义 | 第34-38页 |
| ·本研究的内容 | 第34-35页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第35-38页 |
| 2 材料与方法 | 第38-54页 |
| ·实验材料 | 第38-40页 |
| ·质粒、菌株和蓝藻株 | 第38-39页 |
| ·工具酶和试剂 | 第39-40页 |
| ·主要仪器 | 第40页 |
| ·实验方法 | 第40-54页 |
| ·培养基的配制 | 第40-41页 |
| ·蓝藻的培养、纯化及保存 | 第41-42页 |
| ·目的基因的克隆 | 第42-45页 |
| ·hGM-CSF基因的克隆及SD序列的修改 | 第42-43页 |
| ·glnA基因的克隆 | 第43-45页 |
| ·载体的构建 | 第45-47页 |
| ·质粒DNA的制备 | 第45页 |
| ·酶解反应 | 第45-46页 |
| ·酶切片段的纯化和回收 | 第46页 |
| ·连接反应 | 第46-47页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第47页 |
| ·大肠杆菌的转化 | 第47页 |
| ·转化子的鉴定 | 第47页 |
| ·蓝藻的转化和筛选 | 第47-48页 |
| ·蓝藻的转化 | 第47-48页 |
| ·转基因蓝藻的筛选 | 第48页 |
| ·转基因藻的DNA检测 | 第48-49页 |
| ·蓝藻的破碎 | 第48页 |
| ·蓝藻总DNA的提取 | 第48页 |
| ·转基因藻的PCR鉴定 | 第48-49页 |
| ·转基因藻的Western Blot分析 | 第49-50页 |
| ·转基因藻蛋白样品的制备 | 第49页 |
| ·蛋白样品的定量 | 第49页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第49-50页 |
| ·转移 | 第50页 |
| ·免疫反应 | 第50页 |
| ·转基因藻生理活性的检测 | 第50-51页 |
| ·生长曲线的测定 | 第50页 |
| ·光合放氧活性的测定 | 第50-51页 |
| ·转基因藻培养条件的优化 | 第51-54页 |
| ·不同pH值对转基因藻生长影响的测定 | 第51-52页 |
| ·不同温度对转基因藻生长影响的测定 | 第52页 |
| ·不同培养基对转基因藻生长影响的测定 | 第52页 |
| ·添加不同碳源对转基因藻生长影响的测定 | 第52-54页 |
| 3 结果与分析 | 第54-80页 |
| ·hGM-CSF基因在鱼腥藻7120中的表达与检测 | 第54-60页 |
| ·穿梭表达载体pDC-GMs的构建 | 第54-58页 |
| ·穿梭表达载体pDC-GMs的构建图 | 第54-55页 |
| ·hGM-CSF的核苷酸及氨基酸序列 | 第55页 |
| ·hGM-SCF基因的克隆及SD序列的修改 | 第55-56页 |
| ·中间载体的构建 | 第56-58页 |
| ·穿梭表达载体的构建 | 第58页 |
| ·GMs藻株的获得 | 第58-59页 |
| ·GMs藻株的平板筛选 | 第58-59页 |
| ·GMs藻株的液体筛选与扩大培养 | 第59页 |
| ·GMs藻株的检测 | 第59-60页 |
| ·GMs藻株的PCR检测 | 第59-60页 |
| ·GMs藻株表达产物的Western Blot检测 | 第60页 |
| ·环境因子对GMs藻株生长的影响 | 第60-66页 |
| ·温度对GMs藻株生长的影响 | 第60-62页 |
| ·pH值对GMs藻株生长的影响 | 第62-63页 |
| ·不同培养基对GMs藻株生长的影响 | 第63-66页 |
| ·GMs藻株生理活性的测定 | 第66-68页 |
| ·GMs藻株生长曲线的测定 | 第66页 |
| ·GMs藻株光合放氧活性的测定 | 第66-68页 |
| ·添加外源碳源对GMs藻株生长的影响 | 第68-74页 |
| ·添加无机碳源对转GMs藻株生长的影响 | 第68-71页 |
| ·添加有机碳源对转GMs藻株生长的影响 | 第71-74页 |
| ·整合载体pRG-GM的构建 | 第74-80页 |
| ·整合载体pRG-GM的构建图 | 第74页 |
| ·glnA基因的编码区核苷酸序列 | 第74-75页 |
| ·整合平台glnA基因的克隆 | 第75-77页 |
| ·整合载体pRG-GM的构建 | 第77页 |
| ·实验后分析 | 第77-80页 |
| 4 讨论 | 第80-88页 |
| ·在鱼腥藻7120中表达hGM-CSF基因的可行性 | 第80-82页 |
| ·利用基因工程手段制备hGM-CSF非常必要 | 第80页 |
| ·用鱼腥藻7120作为宿主表达hGM-CSF有一定的优越性 | 第80-81页 |
| ·在鱼腥藻7120种成功的表达了hGM-CSF | 第81-82页 |
| ·转录水平上的调控对外源基因在蓝藻中表达的影响 | 第82-83页 |
| ·SD序列对外源基因表达效率的影响 | 第82-83页 |
| ·本研究所选用的启动子PpsbA为强启动子 | 第83页 |
| ·外源hGM-CSF基因的转入对转基因藻生长及光合活性的影响 | 第83-84页 |
| ·通过优化培养条件提高转基因藻的生长 | 第84-85页 |
| ·不同温度条件对转基因藻生长的影响 | 第84页 |
| ·不同pH对转基因藻生长的影响 | 第84-85页 |
| ·无机碳源的添加对转基因藻生长的影响 | 第85页 |
| ·有机碳源的添加对转基因藻生长的影响 | 第85页 |
| ·构建了整合载体pRG-GM | 第85-88页 |
| 5 总结 | 第88-92页 |
| ·修改后的hGM-CSF基因在鱼腥藻7120中的表达 | 第88页 |
| ·转基因藻培养条件的优化 | 第88-89页 |
| ·GMs藻株生长曲线的测定及其对光合活性的影响 | 第89页 |
| ·测定不同外源碳源对转基因藻生长的影响 | 第89页 |
| ·克隆glnA基因作为整合平台,构建成整合载体pRG-GM | 第89页 |
| ·工作中存在的问题和展望 | 第89-92页 |
| ·工作中存在的问题 | 第90页 |
| ·展望 | 第90-92页 |
| 6 参考文献 | 第92-102页 |
| 附录 | 第102-105页 |
| hGM-CSF基因修改SD序列PCR产物测序报告 | 第102-103页 |
| glnA基因PCR产物测序报告 | 第103-105页 |
| 符号与缩写表 | 第105-108页 |
| 致谢 | 第108-109页 |
| 论文独创性声明 | 第109页 |
| 论文使用授权声明 | 第109页 |
