| 摘要 | 第1页 |
| 关键字 | 第6-7页 |
| ABSTRACT | 第7页 |
| KEYWORD | 第7-8页 |
| 1 前言 | 第8-26页 |
| ·受体型酪氨酸激酶的一般特征 | 第8页 |
| ·表皮生长因子受体 | 第8-14页 |
| ·结构特征 | 第8-9页 |
| ·配基依赖的受体激活 | 第9-10页 |
| ·非配基依赖的受体激活 | 第10-11页 |
| ·MAPK 信号通路 | 第11页 |
| ·PI_3K/Akt 信号通路 | 第11-12页 |
| ·受体内吞与降解 | 第12页 |
| ·其他的负向调节机制 | 第12-13页 |
| ·表皮生长因子受体与肿瘤的关系 | 第13-14页 |
| ·SRC 家族激酶 | 第14-16页 |
| ·结构特征和调节方式 | 第14-15页 |
| ·Src 与表皮生长因子受体的相互作用 | 第15-16页 |
| ·CSK 和CBP 的背景介绍 | 第16-20页 |
| ·Csk 的基本结构与功能 | 第16页 |
| ·Cbp 的结构特征 | 第16-18页 |
| ·Cbp 的基本功能 | 第18-20页 |
| ·其他跨膜接头蛋白 | 第20页 |
| ·脂膜微区 | 第20-23页 |
| ·胞膜窖 | 第20页 |
| ·最初的脂膜微区假说 | 第20-22页 |
| ·脂膜微区的功能 | 第22-23页 |
| ·脂膜微区概念的更新 | 第23页 |
| ·P120CTN | 第23-26页 |
| ·犰狳(armadillo)蛋白 | 第23-24页 |
| ·p120ctn 的基因及蛋白质一级结构特征 | 第24页 |
| ·p120ctn 的功能 | 第24-26页 |
| 2 课题立意和实验工作的框架结构 | 第26-27页 |
| 3 实验材料 | 第27-31页 |
| 4 实验方法 | 第31-39页 |
| ·分子克隆 | 第31-32页 |
| ·质粒的小量制备 | 第31页 |
| ·PCR | 第31页 |
| ·DNA 的酶切 | 第31页 |
| ·DNA 5’端去磷酸化 | 第31页 |
| ·DNA 琼脂糖凝胶电泳 | 第31-32页 |
| ·DNA 片断的连接 | 第32页 |
| ·融合蛋白的表达与纯化 | 第32-33页 |
| ·感受态细菌制备 | 第32页 |
| ·质粒DNA 转化细菌 | 第32页 |
| ·GST 融合蛋白的表达与纯化 | 第32-33页 |
| ·6-His 融合蛋白的表达与纯化 | 第33页 |
| ·细胞生物学操作 | 第33-34页 |
| ·通常培养 | 第33页 |
| ·磷酸钙转染方法 | 第33页 |
| ·细胞因子刺激 | 第33-34页 |
| ·建立稳定表达细胞株 | 第34页 |
| ·反转录病毒的制备和细胞转化实验 | 第34页 |
| ·软琼脂集落形成实验 | 第34页 |
| ·生物化学操作 | 第34-36页 |
| ·免疫沉淀 | 第34页 |
| ·免疫印迹(Western-Blot) | 第34-35页 |
| ·蛋白质的定量 | 第35页 |
| ·体外结合(PullDown Assay) | 第35页 |
| ·考马斯染色 | 第35页 |
| ·嗜银染色 | 第35-36页 |
| ·抗体的制备和纯化 | 第36-39页 |
| ·大白兔和小鼠的免疫 | 第36页 |
| ·杂交瘤细胞与脾细胞的融合及筛选 | 第36页 |
| ·亲合纯化 | 第36-39页 |
| 5 实验结果 | 第39-77页 |
| ·检测细胞内源性的CBP 蛋白 | 第39-42页 |
| ·CBP 抑制EGF 诱导的信号转导 | 第42-52页 |
| ·EGFR 高表达引起Cbp 酪氨酸磷酸化增加 | 第42-43页 |
| ·EGF 诱导的Cbp 酪氨酸磷酸化以及与Csk 的结合 | 第43-45页 |
| ·EGF 通过SFK 诱导Cbp 酪氨酸磷酸化 | 第45-46页 |
| ·Cbp 的Tyr317 位点介导了Cbp 与Csk 的结合 | 第46-48页 |
| ·Cbp 抑制EGF 诱导的Src,ERK1/2 和 Akt-1 激活 | 第48-52页 |
| ·CBP 调节EGF 诱导的信号转化以及其他细胞活动 | 第52-57页 |
| ·Cbp-Csk 复合物调节EGF 诱导的细胞转化 | 第52-54页 |
| ·Cbp 影响细胞迁移 | 第54-55页 |
| ·Cbp-Csk 复合物抑制肿瘤细胞在软琼脂中的生长 | 第55-56页 |
| ·裸鼠体内成瘤实验 | 第56-57页 |
| ·CBP 与受体型酪氨酸激酶的其他相互作用 | 第57-67页 |
| ·Cbp 高表达抑制EGFR 的酪氨酸磷酸化 | 第57-58页 |
| ·多种受体型酪氨酸激酶的过表达均引起Cbp 的磷酸化 | 第58-59页 |
| ·Cbp 结合FGFR1 并改变其表观分子量 | 第59-61页 |
| ·各种Cbp 突变体和FGFR1 的相互作用 | 第61-62页 |
| ·Cbp 和FR52 在NIH3T3 细胞中的共定位 | 第62-66页 |
| ·Cbp 和Insulin 受体结合 | 第66-67页 |
| ·CBP 和脂膜微区的相互作用 | 第67-72页 |
| ·Cbp, EGFR, Src 和部分Csk 都定位于脂膜微区 | 第67-70页 |
| ·Cbp 和caveolin-1 的结合 | 第70页 |
| ·胆固醇萃取试剂处理细胞对Cbp 酪氨酸磷酸化的影响 | 第70-71页 |
| ·Cbp 可能是脂膜微区中主要的Csk 结合蛋白 | 第71-72页 |
| ·新的CSK 结合蛋白 | 第72-76页 |
| ·体外结合实验 | 第73-74页 |
| ·得到p120ctn 的基因 | 第74-75页 |
| ·Csk 结合p120ctn 的体内验证 | 第75-76页 |
| ·合作课题 | 第76-77页 |
| ·白介素4 激活CTL44 细胞的STAT6 | 第76-77页 |
| 6 讨论 | 第77-82页 |
| ·CBP 调节EGF 信号转导的分子机制 | 第77-78页 |
| ·CBP 调节细胞转化和生长的分子机制 | 第78-79页 |
| ·CBP 调节FGFR 相关的信号转导 | 第79-81页 |
| ·CBP 和脂膜微区的关系 | 第81-82页 |
| 7 结论 | 第82-84页 |
| 8 致谢 | 第84-85页 |
| 参考文献 | 第85-91页 |
| 附录 | 第91-103页 |
| 中科院上海生命科学研究院 研究生学位论文声明 | 第103页 |
| 研究生学位论文版权使用授权声明 | 第103页 |
