鲫鱼gherlin基因cDNA序列基因的克隆与原核表达研究
| 中文摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-21页 |
| 1 GHRELIN的分布 | 第11-13页 |
| 2 GHRELIN的生理功能 | 第13-17页 |
| ·调节垂体激素的分泌 | 第13-15页 |
| ·调节摄食 | 第15-17页 |
| ·调节繁殖 | 第17页 |
| 3 鱼类GHRELIN的氨基酸组成与序列分析 | 第17-18页 |
| 4 GHRELIN基因的分离、克隆和表达 | 第18-20页 |
| 5 试验目的及意义 | 第20-21页 |
| 第二章 鲫鱼GHRELIN基因的克隆 | 第21-36页 |
| 1 材料 | 第22-24页 |
| ·试验动物 | 第22页 |
| ·菌株和载体 | 第22页 |
| ·主要试剂 | 第22页 |
| ·溶液配制 | 第22-23页 |
| ·主要仪器设备 | 第23-24页 |
| 2 方法 | 第24-29页 |
| ·肠道的分离和总RNA的提取 | 第24页 |
| ·ghrelin基因的克隆 | 第24-29页 |
| ·ghrelin基因生物信息学分析 | 第29页 |
| ·ghrelin基因的系统进化树分析 | 第29页 |
| 3 结果 | 第29-34页 |
| ·肠道总RNA | 第29页 |
| ·ghrelin基因的克隆 | 第29-30页 |
| ·重组质粒PCR鉴定 | 第30页 |
| ·序列测定 | 第30页 |
| ·ghrelin基因生物信息学分析 | 第30-34页 |
| ·系统进化树分析 | 第34页 |
| 4 分析和讨论 | 第34-35页 |
| 5 小结 | 第35-36页 |
| 第三章 鲫鱼GHRELIN基因在不同组织表达量 | 第36-41页 |
| 1 材料 | 第36页 |
| ·实验动物 | 第36页 |
| ·主要试剂 | 第36页 |
| 2 方法 | 第36-38页 |
| ·引物设计 | 第36-37页 |
| ·荧光定量 | 第37-38页 |
| 3 结果 | 第38-39页 |
| ·扩增产物的特异性 | 第38-39页 |
| ·ghrelin基因的组织表达 | 第39页 |
| 4 讨论 | 第39-41页 |
| ·荧光定量结果的数据处理 | 第39-40页 |
| ·ghrelin基因在组织中的表达 | 第40-41页 |
| 第四章 鲫鱼GHRELIN基因成熟蛋白的原核表达 | 第41-53页 |
| 1 材料 | 第41-43页 |
| ·菌株和质粒 | 第41页 |
| ·主要试剂 | 第41页 |
| ·溶液配制 | 第41-43页 |
| 2 方法 | 第43-46页 |
| ·ghrelin基因的亚克隆 | 第43页 |
| ·表达载体质粒的获得和处理 | 第43-44页 |
| ·目的基因和表达载体的双酶切 | 第44页 |
| ·成熟蛋白基因重组表达质粒的构建 | 第44页 |
| ·成熟蛋白基因重组表达质粒的诱导表达 | 第44-46页 |
| 3 结果 | 第46-50页 |
| ·ghrelin基因的亚克隆 | 第46页 |
| ·酶切鉴定 | 第46-47页 |
| ·重组表达蛋白的SDS-PAGE鉴定 | 第47-48页 |
| ·原核表达条件的优化 | 第48-49页 |
| ·诱导表达和可溶性检测 | 第49-50页 |
| 4 讨论 | 第50-52页 |
| ·鲫鱼ghrelin重组成熟蛋白表达载体的选择 | 第50-51页 |
| ·鲫鱼ghrelin重组成熟蛋白表达条件的优化 | 第51页 |
| ·鲫鱼ghrelin重组成熟蛋白可溶性鉴定 | 第51-52页 |
| 5 小结 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
| 附录 | 第57页 |
