| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 缩略语(abbreviations) | 第8-10页 |
| 第一章 前言 | 第10-21页 |
| 1．1 阿维链霉菌研究概况 | 第10-11页 |
| 1．2 Streptomyces avermitilis基因组学 | 第11-12页 |
| 1．3 阿维链霉菌生物合成的分子生物学研究进展 | 第12-19页 |
| 1．3．1 avermectin起始单元的生物合成 | 第14页 |
| 1．3．2 avermectin聚酮体的生物合成 | 第14-16页 |
| 1．3．3 avermectin聚酮体的后修饰 | 第16页 |
| 1．3．4 L-齐墩果糖的生物合成及与avermectin糖苷配基的连接 | 第16-17页 |
| 1．3．5 寡霉素的生物合成 | 第17-18页 |
| 1．3．6 阿维链霉菌生物合成的调控 | 第18-19页 |
| 1．4 阿维菌素的结构改造 | 第19-20页 |
| 1．5 本研究的立题依据、目的和意义 | 第20-21页 |
| 第二章 材料与方法 | 第21-34页 |
| 2．1 材料 | 第21-26页 |
| 2．1．1 菌株 | 第21-22页 |
| 2．1．2 质粒 | 第22-23页 |
| 2．1．3 PCR引物 | 第23页 |
| 2．1．4 培养基和生化试剂 | 第23-25页 |
| 2．1．5 仪器设备 | 第25-26页 |
| 2．2 实验方法 | 第26-34页 |
| 2．2．1 菌种培养及保藏 | 第26页 |
| 2．2．2 大肠杆菌质粒 DNA的小量提取(碱裂解法) | 第26页 |
| 2．2．3 大肠杆菌感受态的制备及质粒的热激转化 | 第26-27页 |
| 2．2．4 大肠杆菌质粒 DNA的少量快速提取及检测 | 第27页 |
| 2．2．5 链霉菌总 DNA的少量快速提取 | 第27页 |
| 2．2．6 PCR | 第27-28页 |
| 2．2．7 DNA片段的回收 | 第28页 |
| 2．2．8 载体的去磷酸化 | 第28-29页 |
| 2．2．9 DNA连接 | 第29页 |
| 2．2．10 PCR介导的定向基因置换技术 | 第29-30页 |
| 2．2．11 大肠杆菌与链霉菌之间的属间接合转移 | 第30页 |
| 2．2．12 发酵培养 | 第30页 |
| 2．2．13 菌体浓度的测定 | 第30-31页 |
| 2．2．14 阿维菌素效价的测定 | 第31页 |
| 2．2．15 总糖含量测定 | 第31-32页 |
| 2．2．16 还原糖含量测定 | 第32页 |
| 2．2．17 氨态氮测定 | 第32-34页 |
| 第三章 结果与分析 | 第34-51页 |
| 3．1 bkdF基因的中断 | 第34-46页 |
| 3．1．1 基因中断和基因置换的基本原理 | 第34页 |
| 3．1．2 PCR介导的基因中断和基因置换的基本原理 | 第34-37页 |
| 3．1．3 bkdF基因中断载体的构建 | 第37-41页 |
| 3．1．4 pXW0309通过接合转移导入阿维链霉菌 | 第41页 |
| 3．1．5 筛选双交换菌株 | 第41-42页 |
| 3．1．6 bkdF基因中断的PCR验证 | 第42-43页 |
| 3．1．7 bkdF基因中断菌株发酵产物的HPLC和MS分析 | 第43-45页 |
| 3．1．8 添加前体物对基因中断菌株BIB0423产素的影响 | 第45页 |
| 3．1．9 基因中断菌株BIB0423的发酵分析 | 第45-46页 |
| 3．2 nsdA基因的中断 | 第46-51页 |
| 3．2．1 PCR克隆nsdA基因 | 第46-47页 |
| 3．2．2 nsdA基因中断载体pHL214 | 第47-48页 |
| 3．2．3 接合转移及双交换菌株的筛选 | 第48页 |
| 3．2．4 PCR验证nsdA基因中断 | 第48-49页 |
| 3．2．5 nsdA基因中断菌株的发酵产物分析 | 第49-51页 |
| 第四章 总结与讨论 | 第51-55页 |
| 4．1 小结 | 第51页 |
| 4．2 讨论 | 第51-53页 |
| 4．3 展望 | 第53-55页 |
| 参考文献 | 第55-59页 |
| 致谢 | 第59页 |
