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芽殖酵母Def1蛋白在维持端粒稳定中的作用

1. 摘要第1-8页
2. 背景第8-18页
   ·端粒及其主要功能第8-9页
   ·端粒复合体第9-10页
   ·CDC13/STN1/TEN1第10页
   ·酵母yKu 异源二聚体蛋白第10-11页
   ·其它端粒调节蛋白因子第11-12页
   ·端粒酶招募与DNA 保护第12-15页
   ·端粒单链DNA 的产生第15-16页
   ·端粒酶非依赖的存活细胞类型第16页
   ·Pif1p 解旋酶蛋白家族第16-17页
   ·寻找与Rrm3p 相互作用的蛋白第17-18页
3. 实验结果第18-64页
     ·Def1p 蛋白的发现第18-23页
     ·DEF1 基因的敲除导致酵母细胞的端粒缩短第23-30页
     ·DEF1 基因缺失的细胞生长缓慢不是由于端粒缩短而引起第30-31页
     ·DEF1 与RRM3 的相互关系第31页
     ·DEF1 基因缺失的细胞表现温度敏感第31-37页
     ·DEF1 与端粒酶组分 EST2 或 EST3 基因的双缺失能加速细胞的衰老的速度第37-40页
     ·DEF1 在产生II 型的端粒酶非依赖的幸存细胞中的作用第40-44页
     ·Def1 蛋白的功能缺失导致端粒单链 DNA 的增长,而在 DEF1 基因缺失细胞中,其增长的端粒单链 DNA 和缩短的端粒表型都依赖于 Ex01 蛋白的存在第44-47页
     ·Def1p 与yKu70 相互结合第47-49页
   ·Def1p 与端粒 DNA 的结合和yKu70 与端粒的 DNA 结合不相互依赖第49-54页
   ·Def1p 与端粒DNA 直接相互作用第54-61页
   ·Def1 蛋白富含谷氨酰胺并可形成多聚体第61-64页
4. 结论第64-76页
   ·结果小结第64-66页
   ·假设的模型第66-68页
   ·未来的工作方向第68页
 减数分裂第68-70页
 非同源染色体末端融合(NHEJ)第70-71页
 核糖体DNA 染色体外环的形成第71-76页
5. 材料与方法第76-83页
   ·蛋白质的质谱分析第76页
     ·GST 融合蛋白的表达与纯化第76-77页
   ·鸡源(抗Def1蛋白)抗体IgY的制备与纯化第77-78页
   ·免疫共沉淀第78页
   ·酵母四孢子分析第78页
   ·用玻璃珠的方法抽取酵母基因组DNA第78-79页
   ·LiAc/ss-DNA/PEG-酵母转化第79页
   ·端粒长短的Southern-blot 检测第79-80页
   ·端粒的位置效应第80页
   ·酵母细胞的免疫荧光检测第80页
   ·染色质的免疫共沉淀实验第80-82页
   ·酵母细胞的生长实验第82页
   ·凝胶迟滞实验和凝胶过滤实验第82-83页
   ·核糖体DNA 染色体外环的检测第83页
   ·线性质粒修复实验第83页
6. 参考文献第83-89页
7. 发表文章目录第89-90页
8. 致谢第90页

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