1. 摘要 | 第1-8页 |
2. 背景 | 第8-18页 |
·端粒及其主要功能 | 第8-9页 |
·端粒复合体 | 第9-10页 |
·CDC13/STN1/TEN1 | 第10页 |
·酵母yKu 异源二聚体蛋白 | 第10-11页 |
·其它端粒调节蛋白因子 | 第11-12页 |
·端粒酶招募与DNA 保护 | 第12-15页 |
·端粒单链DNA 的产生 | 第15-16页 |
·端粒酶非依赖的存活细胞类型 | 第16页 |
·Pif1p 解旋酶蛋白家族 | 第16-17页 |
·寻找与Rrm3p 相互作用的蛋白 | 第17-18页 |
3. 实验结果 | 第18-64页 |
·Def1p 蛋白的发现 | 第18-23页 |
·DEF1 基因的敲除导致酵母细胞的端粒缩短 | 第23-30页 |
·DEF1 基因缺失的细胞生长缓慢不是由于端粒缩短而引起 | 第30-31页 |
·DEF1 与RRM3 的相互关系 | 第31页 |
·DEF1 基因缺失的细胞表现温度敏感 | 第31-37页 |
·DEF1 与端粒酶组分 EST2 或 EST3 基因的双缺失能加速细胞的衰老的速度 | 第37-40页 |
·DEF1 在产生II 型的端粒酶非依赖的幸存细胞中的作用 | 第40-44页 |
·Def1 蛋白的功能缺失导致端粒单链 DNA 的增长,而在 DEF1 基因缺失细胞中,其增长的端粒单链 DNA 和缩短的端粒表型都依赖于 Ex01 蛋白的存在 | 第44-47页 |
·Def1p 与yKu70 相互结合 | 第47-49页 |
·Def1p 与端粒 DNA 的结合和yKu70 与端粒的 DNA 结合不相互依赖 | 第49-54页 |
·Def1p 与端粒DNA 直接相互作用 | 第54-61页 |
·Def1 蛋白富含谷氨酰胺并可形成多聚体 | 第61-64页 |
4. 结论 | 第64-76页 |
·结果小结 | 第64-66页 |
·假设的模型 | 第66-68页 |
·未来的工作方向 | 第68页 |
减数分裂 | 第68-70页 |
非同源染色体末端融合(NHEJ) | 第70-71页 |
核糖体DNA 染色体外环的形成 | 第71-76页 |
5. 材料与方法 | 第76-83页 |
·蛋白质的质谱分析 | 第76页 |
·GST 融合蛋白的表达与纯化 | 第76-77页 |
·鸡源(抗Def1蛋白)抗体IgY的制备与纯化 | 第77-78页 |
·免疫共沉淀 | 第78页 |
·酵母四孢子分析 | 第78页 |
·用玻璃珠的方法抽取酵母基因组DNA | 第78-79页 |
·LiAc/ss-DNA/PEG-酵母转化 | 第79页 |
·端粒长短的Southern-blot 检测 | 第79-80页 |
·端粒的位置效应 | 第80页 |
·酵母细胞的免疫荧光检测 | 第80页 |
·染色质的免疫共沉淀实验 | 第80-82页 |
·酵母细胞的生长实验 | 第82页 |
·凝胶迟滞实验和凝胶过滤实验 | 第82-83页 |
·核糖体DNA 染色体外环的检测 | 第83页 |
·线性质粒修复实验 | 第83页 |
6. 参考文献 | 第83-89页 |
7. 发表文章目录 | 第89-90页 |
8. 致谢 | 第90页 |