| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-8页 |
| 目录 | 第8-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-35页 |
| ·萜类化合物简述 | 第13-15页 |
| ·萜类化合物的分类 | 第13页 |
| ·萜类化合物的功能 | 第13-15页 |
| ·萜类化合物生物合成途径的研究历程 | 第15-21页 |
| ·甲羟戊酸(MVA)生物合成途径 | 第16-17页 |
| ·2-甲基-D-赤藻糖醇-4-磷酸(MEP)生物合成途径 | 第17-19页 |
| ·萜类化合物两条生物合成途径的分布 | 第19-21页 |
| ·MEP生物合成途径中关键酶DXS和DXR的研究进展 | 第21-30页 |
| ·1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸合酶(DXS) | 第21-24页 |
| ·1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构化酶(DXR) | 第24-30页 |
| ·同位素标记及未标记DXP和MEP合成的研究进展 | 第30-33页 |
| ·化学法合成DXP和MEP | 第30-31页 |
| ·酶法合成DXP和MEP | 第31-33页 |
| ·MEP途径在生物医药领域中的应用及展望 | 第33-35页 |
| 第二章 1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸合酶催化磷酸丙糖异构化的研究 | 第35-76页 |
| 引言 | 第35-36页 |
| ·实验材料与仪器 | 第36-41页 |
| ·菌株与质粒 | 第36页 |
| ·试剂 | 第36-37页 |
| ·引物 | 第37页 |
| ·其它主要试剂的配制 | 第37-40页 |
| ·主要仪器 | 第40-41页 |
| ·实验方法 | 第41-54页 |
| ·EcDXS的表达与纯化 | 第41-43页 |
| ·D-甘油醛-3-磷酸的化学合成 | 第43-44页 |
| ·EcDXS催化DXP合成活性的检测 | 第44-46页 |
| ·EcDXS催化磷酸丙糖异构活性的测定 | 第46-48页 |
| ·以tpi基因敲除菌株FB21547(DE3)为宿主表达EcDXS及酶活性检测 | 第48-49页 |
| ·EcDXS催化磷酸丙糖异构的动力学实验 | 第49-51页 |
| ·~1H-NMR技术分析EcDXS催化磷酸丙糖异构的作用机制 | 第51-52页 |
| ·RcDXS和PaDXS的制备及酶活性检测 | 第52-54页 |
| ·结果与分析 | 第54-73页 |
| ·EcDXS的表达和纯化结果 | 第54-55页 |
| ·D-甘油醛-3-磷酸的化学合成结果 | 第55-56页 |
| ·EcDXS催化DXP合成的实验结果与分析 | 第56-58页 |
| ·EcDXS催化磷酸丙糖异构的实验结果与分析 | 第58-61页 |
| ·以FB21547(DE3)为宿主表达EcDXS的实验结果与分析 | 第61-63页 |
| ·EcDXS催化磷酸丙糖异构的动力学实验结果 | 第63-66页 |
| ·EcDXS催化磷酸丙糖异构的~1H-NMR检测结果与分析 | 第66-70页 |
| ·RcDXS和PaDXS的制备及酶活性检测结果 | 第70-73页 |
| ·讨论 | 第73-74页 |
| ·本章小结 | 第74-76页 |
| 第三章 1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构化酶催化循环的研究 | 第76-109页 |
| 前言 | 第76-78页 |
| ·实验材料与仪器 | 第78-79页 |
| ·菌株 | 第78页 |
| ·试剂 | 第78页 |
| ·主要仪器 | 第78-79页 |
| ·实验方法 | 第79-85页 |
| ·重组酶DXR的制备 | 第79-80页 |
| ·DXP的合成与纯化 | 第80-81页 |
| ·~(18)O标记DXP的制备 | 第81-82页 |
| ·MEP的合成与纯化 | 第82页 |
| ·~(18)O标记MEP的制备 | 第82-83页 |
| ·以~(18)O标记的DXP为底物制备~(18)O标记的MEP | 第83-84页 |
| ·~(18)O交换速率的测定 | 第84页 |
| ·含H_2~(18)O缓冲体系中底物转化速率的测定 | 第84-85页 |
| ·结果与分析 | 第85-102页 |
| ·DXR的表达与纯化结果 | 第85-86页 |
| ·DXP的结构鉴定结果 | 第86页 |
| ·MEP的合成与纯化结果及分析 | 第86-88页 |
| ·~(18)O标记MEP的制备结果及分析 | 第88-93页 |
| ·~(18)O交换速率的测定结果 | 第93-94页 |
| ·含H_2~(18)O缓冲体系中底物转化速率的测定结果 | 第94-96页 |
| ·~(18)O标记DXP的制备结果与分析 | 第96-100页 |
| ·以~(18)O标记DXP合成~(18)O标记MEP的实验结果与分析 | 第100-102页 |
| ·讨论 | 第102-107页 |
| ·本章小结 | 第107-109页 |
| 第四章 总结与展望 | 第109-111页 |
| ·研究总结 | 第109-110页 |
| ·本论文创新点 | 第110页 |
| ·后续研究方向 | 第110-111页 |
| 参考文献 | 第111-127页 |
| 附录 | 第127-132页 |
| 攻读博士期间取得的科研成果 | 第132-133页 |
| 致谢 | 第133页 |
