| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 前言 | 第6-8页 |
| 材料与方法 | 第8-20页 |
| 一、 氨单加氧酶基因(amoA)片段的PCR扩增及条件优化 | 第8-11页 |
| (一) 材料 | 第8-9页 |
| (二) 方法 | 第9-11页 |
| 1 活性污泥中细菌总DNA的快速抽提 | 第9页 |
| 2 amoA基因片段的PCR扩增及条件优化 | 第9-11页 |
| 二、 氨氧化细菌属amoA基因片段的克隆与序列分析 | 第11-15页 |
| (一) 材料 | 第11-12页 |
| (二) 方法 | 第12-15页 |
| 1 PCR产物切胶回收纯化 | 第12页 |
| 2 PCR产物与载体的连接 | 第12页 |
| 3 大肠杆菌感受态细胞制备 | 第12-13页 |
| 4 转化 | 第13页 |
| 5 转化子DNA的提取 | 第13-14页 |
| 6 重组克隆的鉴定 | 第14页 |
| 7 PCR产物的序列分析 | 第14-15页 |
| 三、 MPN-PCR法对生物硝化池中氨氧化细菌的计数 | 第15-18页 |
| (一) 材料 | 第15页 |
| (二) 方法 | 第15-18页 |
| 1 MPN-Griess法 | 第15-16页 |
| 2 MPN-PCR法 | 第16页 |
| 3 MPN数量指标的确定方法 | 第16-18页 |
| 四、 水杨酸-次氯酸盐法测定氨氧化细菌的硝化速率 | 第18-20页 |
| (一) 材料 | 第18页 |
| (二) 方法 | 第18-20页 |
| 1 绘制NH_4~+-N标准曲线 | 第18页 |
| 2 氨氧化细菌硝化速率测定 | 第18-20页 |
| 结果 | 第20-40页 |
| 一、 氨单加氧酶基因(amoA)片段的PCR扩增及条件优化 | 第20-22页 |
| (一) 活性污泥中细菌总DNA的快速抽提 | 第20-21页 |
| (二) 正交实验法建立amoA基因片段的PCR最佳反应体系 | 第21-22页 |
| 二、 氨氧化细菌属amoA基因片段的克隆与序列分析 | 第22-36页 |
| (一) amoA基因片段的克隆与鉴定 | 第22-30页 |
| (二) amoA基因片段的序列测定 | 第30-34页 |
| (三) amoA基因片段的同源性分析 | 第34-35页 |
| (四) amoA基因片段的系统进化分析 | 第35-36页 |
| 三、 MPN-PCR法对生物硝化池中氨氧化细菌属细菌的计数 | 第36-38页 |
| (一) MPN-Griess法检测结果 | 第36页 |
| (二) MPN-PCR法检测结果 | 第36-38页 |
| 四、 水杨酸-次氯酸盐法测定氨氧化细菌的硝化速率 | 第38-40页 |
| 讨论 | 第40-47页 |
| 一、 氨单加氧酶基因片段的特异性扩增及PCR条件的优化分析 | 第40-42页 |
| (一) amoA基因片段特异性扩增引物的设计 | 第40页 |
| (二) PCR反应体系的优化 | 第40-42页 |
| 二、 PCR产物的克隆及DNA序列分析 | 第42-44页 |
| (一) PCR产物的克隆 | 第42-43页 |
| (二) 转化子的筛选鉴定 | 第43-44页 |
| 三、 MPN-PCR法快速定量检测氨氧化细菌 | 第44-47页 |
| 综述 | 第47-54页 |
| 参考文献 | 第54-60页 |
| 致谢 | 第60页 |
