中文摘要 | 第1-7页 |
第一章 前言 | 第7-16页 |
1.1 转基因植物育种现状 | 第7-8页 |
1.2 植物抗病性研究现状及进展 | 第8-12页 |
1.2.1 抗病类型 | 第8-9页 |
1.2.2 植物抗病机制 | 第9-10页 |
1.2.3 植物抗病基因的克隆及应用 | 第10-12页 |
1.3 植物系统获得抗性研究现状与进展 | 第12-13页 |
1.3.1 植物系统获得抗病性概述 | 第12页 |
1.3.2 SAR的信号分子及传导途径 | 第12-13页 |
1.4 拟南芥NPR1基因 | 第13-15页 |
1.5 本研究目的与意义 | 第15-16页 |
第二章 材料与方法 | 第16-29页 |
2.1 菌株和质粒 | 第16页 |
2.2 植物材料 | 第16页 |
2.3 培养基及培养条件 | 第16-18页 |
2.3.1 烟草基因转化用培养基配方 | 第16-17页 |
2.3.2 细菌培养基 | 第17页 |
2.3.3 培养条件 | 第17-18页 |
2.3.4 菌种保存 | 第18页 |
2.4 抗生素 | 第18页 |
2.5 常用溶液及缓冲液 | 第18-19页 |
2.6 转化方法与步骤 | 第19-20页 |
2.6.1 抗生素浓度实验 | 第19页 |
2.6.2 转化步骤 | 第19-20页 |
2.7 转化效率实验 | 第20页 |
2.8 DNA提取 | 第20-23页 |
2.8.1 质粒DNA的提取 | 第21-22页 |
2.8.2 烟草总DNA的提取 | 第22-23页 |
2.9 DNA的酶切、电泳及DNA片段浓度、大小测算 | 第23页 |
2.9.1 DNA酶切 | 第23页 |
2.9.2 电泳及DNA片段浓度、大小测算 | 第23页 |
2.10 DNA片段的回收 | 第23-24页 |
2.11 DNA-DNA杂交 | 第24-26页 |
2.11.1 Southern转移 | 第24-25页 |
2.11.2 探针标记 | 第25页 |
2.11.3 Southern杂交 | 第25-26页 |
2.12 PCR扩增DNA片段 | 第26-27页 |
2.13 ABI DNA自动测序系统测定DNA序列 | 第27页 |
2.14 T_0代转化再生植株的种植 | 第27页 |
2.15 烟草幼苗抗生素敏感实验 | 第27页 |
2.16 转基因烟草幼苗抗生素抗性遗传分析 | 第27-28页 |
2.17 T_1代植株培育 | 第28-29页 |
第三章 结果与分析 | 第29-45页 |
3.1 烟草叶片组织对卡那霉素敏感性测定 | 第29-30页 |
3.2 不同浓度的激素配比对烟草再生频率的影响 | 第30-31页 |
3.3 叶盘侵染时间与菌液浓度对叶盘转化率的影响 | 第31-32页 |
3.3.1 叶盘侵染时间对叶盘转化率的影响 | 第31-32页 |
3.3.2 不同农杆菌菌液浓度对叶盘转化率的影响 | 第32页 |
3.4 生根实验 | 第32-33页 |
3.5 农杆菌介导烟草基因转化效率 | 第33-35页 |
3.6 转基因烟草T_0代分子鉴定 | 第35-37页 |
3.6.1 转基因植株的PCR分析 | 第35-36页 |
3.6.2 转基因植株的PCP—Southern Blotting分析 | 第36-37页 |
3.7 T_0代植株农艺性状观察 | 第37-38页 |
3.8 T_1代烟草幼苗抗生素敏感实验 | 第38-39页 |
3.9 转基因植株后代遗传分析 | 第39-40页 |
3.10 T_1代植株PCR分析 | 第40-41页 |
3.11 T_1代植株PCR产物测序 | 第41-45页 |
第四章 讨论 | 第45-47页 |
4.1 农杆菌介导的烟草转化 | 第45页 |
4.2 转化外源基因的稳定性 | 第45-46页 |
4.3 拟南芥NPR1基因利用 | 第46-47页 |
第五章 小结 | 第47-48页 |
参考文献 | 第48-54页 |
致谢 | 第54页 |