| 中文摘要 | 第1-9页 |
| 英文摘要 | 第9-13页 |
| 缩略语表 | 第13-15页 |
| 前言 | 第15-17页 |
| 文献回顾 | 第17-42页 |
| 一 增殖细胞核抗原及其在肿瘤研究中的应用 | 第17-33页 |
| 二 反义核酸与肿瘤基因治疗 | 第33-42页 |
| 主要实验材料 | 第42-48页 |
| 一 实验动物及细胞株 | 第42页 |
| 二 病人标本来源 | 第42页 |
| 三 菌种及质粒 | 第42-44页 |
| 四 主要试剂 | 第44-45页 |
| 五 主要溶液配制 | 第45-46页 |
| 六 主要仪器 | 第46-48页 |
| 主要实验方法 | 第48-60页 |
| 一 检测胃癌细胞系及胃癌组织中PCNA表达 | 第48-49页 |
| (一) 细胞培养 | 第48页 |
| (二) ABC免疫组织细胞化学染色 | 第48-49页 |
| (三) 阳性细胞半定量分级和统计学处理 | 第49页 |
| (四) 胃癌组织PCNA免疫电镜染色 | 第49页 |
| 二 反义人PCNA基因逆转录病毒表达载体的构建及鉴定 | 第49-53页 |
| (一) 大肠杆菌感受态细胞的制备及转化宿主菌 | 第49-50页 |
| (二) 质粒DNA小量制备 | 第50页 |
| (三) PCNA基因亚克隆及酶切鉴定 | 第50-52页 |
| (四) 逆转录病毒载体与PCNA重组质粒的构建 | 第52页 |
| (五) 质粒DNA的大量制备 | 第52-53页 |
| 三 载体表达的PCNA反义RNA对胃癌细胞的影响 | 第53-60页 |
| (一) Lipofect AMINETM介导转录SGC-7901／细胞 | 第53-54页 |
| (二) 细胞基因组DNA提取 | 第54页 |
| (三) 细胞总RNA提取 | 第54页 |
| (四) 缺口平移法标记DNA探针 | 第54页 |
| (五) 体外转录正义和反义RNA单链探针 | 第54-56页 |
| (六) 核酸分子杂交分析 | 第56-57页 |
| (七) 细胞生长速度测定 | 第57页 |
| (八) 免疫组织化学染色及图象分析 | 第57页 |
| (九) 细胞周期测定 | 第57-58页 |
| (十) 流式细胞仪测定细胞内PCNA及癌基因蛋白 | 第58页 |
| (十一) 透射电镜标本制备 | 第58页 |
| (十二) 裸鼠体内移植瘤生长实验 | 第58-59页 |
| (十三) 统计学处理 | 第59-60页 |
| 实验结果 | 第60-89页 |
| 一 SGC-7901细胞及胃癌组织PCNA蛋白表达 | 第60-68页 |
| 二 PCNA基因的亚克隆及限制性酶切分析 | 第68-69页 |
| 三 PCNA反义RNA逆转录病毒载体的构建及鉴定 | 第69-73页 |
| 四 转染细胞neo基因、PCNA mRNA表达水平检测 | 第73-76页 |
| 五 细胞生长曲线测定结果 | 第76-77页 |
| 六 转染细胞PCNA免疫组化染色及图象分析 | 第77-78页 |
| 七 转染细胞超微结构的变化 | 第78-81页 |
| 八 转染细胞的细胞周期分布 | 第81-83页 |
| 九 流式细胞仪测定的细胞内PCNA抗原含量 | 第83-85页 |
| 十 FCM测定细胞内p21ras、p53和c-myc抗原含量 | 第85页 |
| 十一 转染细胞ras和c-myc基因表达的变化 | 第85-87页 |
| 十二 转染细胞对裸鼠移植瘤影响 | 第87-89页 |
| 讨论 | 第89-101页 |
| 一 胃癌组织PCNA的表达 | 第89-92页 |
| 二 PCNA基因及pDOR-neo载体的分析鉴定 | 第92-93页 |
| 三 逆转录病毒载体表达的PCNA反义RNA的构建 | 第93-94页 |
| 四 关于阳离子脂质体介导DNA转染细胞 | 第94-96页 |
| 五 PCNA反义RNA对胃癌细胞恶性表型的影响 | 第96-101页 |
| 小结 | 第101-102页 |
| 致谢 | 第102-103页 |
| 参考文献 | 第103-119页 |
