| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-11页 |
| 第一章 前言 | 第11-20页 |
| ·1,3-丙二醇的工业应用与生产 | 第11-12页 |
| ·生物合成1,3-丙二醇 | 第12-15页 |
| ·微生物中1,3-PD的合成代谢途径 | 第12-13页 |
| ·甘油脱水酶的主要生产菌 | 第13-14页 |
| ·甘油脱水酶的结构 | 第14页 |
| ·甘油脱水酶失活和激活机制 | 第14-15页 |
| ·定点突变技术和点饱和突变技术 | 第15-17页 |
| ·定点突变技术 | 第15-16页 |
| ·点饱和突变技术 | 第16页 |
| ·反向PCR介导的突变法 | 第16-17页 |
| ·本研究的立论依据和期望目的 | 第17-19页 |
| ·技术路线 | 第19-20页 |
| 第二章 材料与方法 | 第20-31页 |
| ·实验材料 | 第20-21页 |
| ·菌株与质粒 | 第20页 |
| ·酶与试剂 | 第20-21页 |
| ·主要仪器设备 | 第21页 |
| ·培养基及溶液配制 | 第21页 |
| ·方法与步骤 | 第21-31页 |
| ·大肠杆菌XL10-GOLD的培养 | 第21页 |
| ·菌种的保存 | 第21-22页 |
| ·三维结构同源建模 | 第22页 |
| ·甘油脱水酶α亚基498位点饱和突变引物设计和PCR扩增 | 第22-24页 |
| ·化学法大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第24页 |
| ·PCR产物化学转化大肠杆菌感受态细胞 | 第24-25页 |
| ·质粒DNA的小量制备 | 第25页 |
| ·双层平板筛选 | 第25-26页 |
| ·重组子质粒酶切验证 | 第26页 |
| ·外源片段在大肠杆菌中的诱导表达 | 第26页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第26-27页 |
| ·甘油脱水酶粗酶液的制备 | 第27页 |
| ·甘油脱水酶的纯化 | 第27-28页 |
| ·蛋白质含量的测定 | 第28-29页 |
| ·甘油脱水酶活力的测定 | 第29-31页 |
| 第三章 结果与分析 | 第31-48页 |
| ·甘油脱水酶的建模以及能量分析与三维结构分析 | 第31-35页 |
| ·甘油脱水酶的建模和能量分析 | 第31-32页 |
| ·甘油脱水酶的三维结构分析 | 第32-35页 |
| ·甘油脱水酶A亚基498位氨基酸的饱和突变 | 第35-37页 |
| ·反向PCR对目标位点进行突变 | 第35-36页 |
| ·突变子的平板筛选及酶切验证 | 第36-37页 |
| ·突变子序列分析 | 第37页 |
| ·甘油脱水酶的纯化 | 第37-38页 |
| ·甘油脱水酶酶学性质研究 | 第38-48页 |
| ·酶作用的最适温度 | 第38-40页 |
| ·酶作用的最适pH | 第40-42页 |
| ·甘油脱水酶米氏常数Km值的测定 | 第42-46页 |
| ·甘油脱水酶的比活力 | 第46-48页 |
| 第四章 讨论 | 第48-54页 |
| ·PROSA 2003能量预测结果与研究结果的差异 | 第48-49页 |
| ·突变酶活力变化的其它解释 | 第49页 |
| ·甘油脱水酶最适温度和最适PH的改造 | 第49-50页 |
| ·甘油脱水酶B亚基的解聚对酶活力测定的影响 | 第50-52页 |
| ·饱和突变位点的选择 | 第52-54页 |
| 第五章 结论与展望 | 第54-56页 |
| ·结论 | 第54页 |
| ·展望 | 第54-56页 |
| 参考文献 | 第56-64页 |
| 附录 | 第64-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第70页 |