| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 综述 | 第10-24页 |
| 正文 海鲈头肾CDNA文库的构建及hepcidin抗菌肽基因的克隆与表达 | 第24-58页 |
| 前言 | 第24-25页 |
| 1 实验材料 | 第25-29页 |
| ·菌株与质粒 | 第25页 |
| ·实验动物 | 第25页 |
| ·主要实验仪器 | 第25-26页 |
| ·工具酶及抗生素 | 第26页 |
| ·RNA提取相关试剂 | 第26-27页 |
| ·试剂盒 | 第27页 |
| ·DNA,RNA及蛋白Marker | 第27页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳相关试剂 | 第27页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(Tricine-SDS-PAGE)相关试剂 | 第27-28页 |
| ·考马斯亮兰染色相关试剂 | 第28页 |
| ·培养基 | 第28-29页 |
| ·缓冲液 | 第29页 |
| 2 实验方法 | 第29-41页 |
| ·鲈鱼头肾RNA的提取(Trizol法) | 第29-30页 |
| ·Poly(A)~+mRNA分离: | 第30页 |
| ·cDNA文库构建 | 第30-32页 |
| ·Hepcidin基因的扩增及序列测定 | 第32-34页 |
| ·Hepcidin成熟肽基因的人工设计合成 | 第34-35页 |
| ·成熟肽双链hepcidin及pET-32a(+)质粒的双酶切和纯化 | 第35页 |
| ·阳性重组质粒的构建、筛选及鉴定 | 第35-37页 |
| ·阳性重组质粒转化表达菌AD494(DE3) | 第37-38页 |
| ·融合蛋白的表达及纯化 | 第38-39页 |
| ·用Ni-NTA Spin Kit从可溶性上清中纯化表达蛋白 | 第39-40页 |
| ·纯化表达产物的脱盐及酶切 | 第40页 |
| ·Hepcidin重组蛋白抗菌活性的测定 | 第40-41页 |
| 3 实验结果 | 第41-53页 |
| ·海鲈头肾总RNA提取和Poly(A)~+mRNA分离 | 第41页 |
| ·海鲈头肾文库cDNA的合成 | 第41-42页 |
| ·cDNA片段的分级分离和EB平板检测 | 第42页 |
| ·cDNA文库的滴度与文库插入片段的随机测定 | 第42-43页 |
| ·Hepcidin基因的扩增及序列分析 | 第43-44页 |
| ·Hepcidin成熟肽基因的合成 | 第44页 |
| ·Hepcidin成熟肽双链与表达载体pET-32a(+)的双酶切及纯化 | 第44-45页 |
| ·CaCl_2法转化大肠杆菌菌株DH5α | 第45页 |
| ·Hepcidin成熟肽基因的序列分析 | 第45-48页 |
| ·阳性重组质粒转化表达菌AD494(DE3) | 第48页 |
| ·融合蛋白的表达及纯化 | 第48-51页 |
| ·融合蛋白的酶切 | 第51-52页 |
| ·Hepcidin原核表达蛋白抗菌活性的测定 | 第52-53页 |
| 4 讨论 | 第53-56页 |
| 小结 | 第56-58页 |
| 参考文献 | 第58-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 攻读硕士学位期间发表文章 | 第64页 |
