| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-8页 |
| 第1章 引言 | 第8-18页 |
| ·肌钙蛋白的特征结构 | 第8-13页 |
| ·肌钙蛋白I (TnI) | 第8-11页 |
| ·肌钙蛋白T（TnT） | 第11-12页 |
| ·肌钙蛋白C（TnC） | 第12-13页 |
| ·肌钙蛋白的功能及应用 | 第13-17页 |
| ·Tn 在肌肉收缩的作用 | 第13页 |
| ·fsTnI 新功能的研究 | 第13页 |
| ·选题背景及意义 | 第13-17页 |
| ·研究内容的概述 | 第17-18页 |
| 第2章 CTNI 和CTNT 的原核表达及纯化 | 第18-44页 |
| ·实验材料 | 第18-19页 |
| ·cDNA、菌株及质粒 | 第18页 |
| ·主要试剂 | 第18-19页 |
| ·实验用具 | 第19页 |
| ·主要仪器设备 | 第19页 |
| ·试剂配制 | 第19-24页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳缓冲液 | 第19-20页 |
| ·SDS-PAGE 和Western Blot 试剂 | 第20-22页 |
| ·细菌培养基 | 第22-23页 |
| ·纯化缓冲液 | 第23-24页 |
| ·实验方法 | 第24-36页 |
| ·研究策略 | 第24-25页 |
| ·引物设计 | 第25页 |
| ·引物稀释 | 第25页 |
| ·cTnI 和cTnT 编码序列的PCR 扩增 | 第25-26页 |
| ·PCR 产物的琼脂糖凝胶电泳检测 | 第26-27页 |
| ·PCR 产物的胶回收 | 第27-28页 |
| ·pET-32a 载体的扩增及小量提取 | 第28-29页 |
| ·质粒和PCR 产物双酶切 | 第29-30页 |
| ·质粒和PCR 产物酶切片断的胶回收 | 第30页 |
| ·酶切后的PCR 产物片断与pET-32a 载体连接 | 第30-31页 |
| ·连接产物转化DH5a 感受态 | 第31页 |
| ·pET-32a-cTnI/cTnT 重组质粒的小量提取 | 第31页 |
| ·pET-32a-cTnI 和pET-32a-cTnT 重组质粒的鉴定 | 第31-32页 |
| ·重组的人cTnI/cTnT 蛋白的诱导表达 | 第32-33页 |
| ·cTnI/cTnT 蛋白 SDS-PAGE 及western 鉴定 | 第33-35页 |
| ·纯化 | 第35-36页 |
| ·实验结果 | 第36-41页 |
| ·PCR 扩增产物 | 第36页 |
| ·重组pET-32a-cTnI 和pET32a-cTnT 双酶切图 | 第36-37页 |
| ·重组质粒pET-32a-cTnI 和pET32a-cTnT 的测序结果 | 第37页 |
| ·重组质粒pET-32a-cTnI 和pET-32a-cTnT 在 BL21 的表达 | 第37-39页 |
| ·蛋白纯化 | 第39-41页 |
| ·讨论 | 第41-43页 |
| ·质粒pET-32a 的选择优点 | 第41页 |
| ·优化诱导条件提高表达量 | 第41-42页 |
| ·融合蛋白上清样品的纯化 | 第42-43页 |
| ·展望 | 第43-44页 |
| 第3章 真核稳定表达 CTNI | 第44-61页 |
| ·实验材料 | 第44-45页 |
| ·细胞株和质粒 | 第44页 |
| ·主要试剂 | 第44页 |
| ·实验用具 | 第44-45页 |
| ·仪器设备 | 第45页 |
| ·试剂配制 | 第45-46页 |
| ·细胞转染及筛选试剂 | 第45-46页 |
| ·实验方法 | 第46-53页 |
| ·真核重组质粒的构建 | 第46-47页 |
| ·细胞的复苏及换液 | 第47-48页 |
| ·细胞的传代培养及冻存 | 第48页 |
| ·Fugen HD 转染试剂浓度梯度及时间梯度和转染效率 | 第48-49页 |
| ·在哺乳动物细胞中进行瞬时表达 | 第49页 |
| ·在哺乳动物细胞中进行稳定表达 | 第49-50页 |
| ·稳定表达细胞株的基因组检测 | 第50-52页 |
| ·稳定表达细胞株的RT-PCR 检测 | 第52-53页 |
| ·表达细胞株的western 检测 | 第53页 |
| ·实验结果 | 第53-57页 |
| ·在COS-7 细胞中瞬时表达 | 第53-54页 |
| ·在CHO 细胞中稳定表达 | 第54-57页 |
| ·讨论 | 第57-60页 |
| ·展望 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第67页 |
