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用piggyBac进行泥鳅转基因的初步研究

中文摘要第1-7页
Abstract第7-8页
第一章 转基因鱼研究进展(文献综述)第8-19页
 1 外源基因的构建第8-10页
   ·启动子第9页
   ·目的基因第9-10页
 2 鱼类基因转移的方法第10-13页
   ·显微注射法第10-11页
   ·电脉冲法第11页
   ·基因枪法第11页
   ·精子介导基因转移法第11-12页
   ·组织注射法第12页
   ·逆转录病毒感染法第12页
   ·卵母细胞的基因转移第12-13页
 3 转基因鱼的鉴定第13页
   ·分子杂交法第13页
   ·PCR 法第13页
 4 转基因鱼应用潜力第13-14页
   ·快速育种,提高渔业经济效益第13页
   ·改良养殖性能第13-14页
   ·用作生物反应器,生产医药生物制品第14页
 5 转基因鱼研究尚待解决的问题第14-16页
   ·技术问题第14-15页
   ·安全性问题第15-16页
 参考文献第16-19页
第二章 piggyBac 转座子研究进展第19-25页
 1 PiggyBac 转座子的结构第19-20页
 2 PiggyBac 转座子的转座机制第20-21页
 3 PiggyBac 转座载体的相关应用第21-23页
   ·PiggyBac 转座子在转基因昆虫研究中的应用第21页
   ·PiggyBac 转座子在家蚕研究中应用第21-23页
   ·PiggyBac 转座子在哺乳类细胞和斑马鱼中的应用第23页
 参考文献第23-25页
第三章 材料与方法第25-34页
 1 实验材料第25-27页
   ·生物材料第25页
   ·工具酶及Kit第25页
   ·主要实验试剂与配制第25-27页
 2 实验常用仪器设备第27-28页
 3 常用方法第28-32页
   ·基因组DNA 的提取第28页
   ·目的基因的PCR 扩增第28页
   ·碱裂解法制备质粒 DNA第28-29页
   ·感受态细胞的制备第29-30页
   ·重组DNA 的转化第30页
   ·酶切反应第30页
   ·连接反应第30-31页
   ·琼脂糖凝胶电泳第31页
   ·胶分离回收目的片段第31页
   ·探针的制备第31页
   ·DNA 转移前尼龙膜的处理第31页
   ·DNA 转移第31-32页
   ·预杂交第32页
   ·杂交第32页
   ·洗膜和显影第32页
   ·用构建好的载体转染BmN 细胞第32页
 参考文献第32-34页
第四章 基于piggyBac 转座子的泥鳅转基因初探第34-41页
 1 材料和方法第35-36页
   ·材料第35页
   ·方法第35-36页
 2 结果第36-39页
   ·卵子的受精率和孵化率第36页
   ·转基因幼鱼初步筛选第36-37页
   ·PCR 法检测转基因泥鳅第37-38页
   ·斑点杂交法检测转基因泥鳅第38-39页
 3 讨论第39页
 参考文献第39-41页
第五章 团头鲂β-actin 启动子驱动的DsRed 表达元件构建与活性研究第41-53页
 1 材料第42页
   ·材料与试剂第42页
 2 方法第42-45页
   ·基因组DNA 提取第42页
   ·团头鲂β-actin 启动子的克隆与测序第42-43页
   ·序列分析第43页
   ·转基因载体PigA3GFP-promoter-DsRed–PolyA 的构建第43页
   ·家蚕BmN 细胞的培养和转染第43-45页
 3 结果与分析第45-50页
   ·团头鲂β-actin 启动子片段的克隆第45页
   ·团头鲂β-actin 启动子片段序列分析第45-47页
   ·同源性分析第47-48页
   ·启动子区域的单链二级结构分析第48页
   ·转基因载体的鉴定第48-49页
   ·转基因载体PigA3GFP-promoter-DsRed–PolyA 在BmN 细胞中的表达第49-50页
 4 讨论第50-51页
 参考文献第51-53页
结论第53-54页
附录第54-56页
致谢第56页

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