中文摘要 | 第1-7页 |
Abstract | 第7-8页 |
第一章 转基因鱼研究进展(文献综述) | 第8-19页 |
1 外源基因的构建 | 第8-10页 |
·启动子 | 第9页 |
·目的基因 | 第9-10页 |
2 鱼类基因转移的方法 | 第10-13页 |
·显微注射法 | 第10-11页 |
·电脉冲法 | 第11页 |
·基因枪法 | 第11页 |
·精子介导基因转移法 | 第11-12页 |
·组织注射法 | 第12页 |
·逆转录病毒感染法 | 第12页 |
·卵母细胞的基因转移 | 第12-13页 |
3 转基因鱼的鉴定 | 第13页 |
·分子杂交法 | 第13页 |
·PCR 法 | 第13页 |
4 转基因鱼应用潜力 | 第13-14页 |
·快速育种,提高渔业经济效益 | 第13页 |
·改良养殖性能 | 第13-14页 |
·用作生物反应器,生产医药生物制品 | 第14页 |
5 转基因鱼研究尚待解决的问题 | 第14-16页 |
·技术问题 | 第14-15页 |
·安全性问题 | 第15-16页 |
参考文献 | 第16-19页 |
第二章 piggyBac 转座子研究进展 | 第19-25页 |
1 PiggyBac 转座子的结构 | 第19-20页 |
2 PiggyBac 转座子的转座机制 | 第20-21页 |
3 PiggyBac 转座载体的相关应用 | 第21-23页 |
·PiggyBac 转座子在转基因昆虫研究中的应用 | 第21页 |
·PiggyBac 转座子在家蚕研究中应用 | 第21-23页 |
·PiggyBac 转座子在哺乳类细胞和斑马鱼中的应用 | 第23页 |
参考文献 | 第23-25页 |
第三章 材料与方法 | 第25-34页 |
1 实验材料 | 第25-27页 |
·生物材料 | 第25页 |
·工具酶及Kit | 第25页 |
·主要实验试剂与配制 | 第25-27页 |
2 实验常用仪器设备 | 第27-28页 |
3 常用方法 | 第28-32页 |
·基因组DNA 的提取 | 第28页 |
·目的基因的PCR 扩增 | 第28页 |
·碱裂解法制备质粒 DNA | 第28-29页 |
·感受态细胞的制备 | 第29-30页 |
·重组DNA 的转化 | 第30页 |
·酶切反应 | 第30页 |
·连接反应 | 第30-31页 |
·琼脂糖凝胶电泳 | 第31页 |
·胶分离回收目的片段 | 第31页 |
·探针的制备 | 第31页 |
·DNA 转移前尼龙膜的处理 | 第31页 |
·DNA 转移 | 第31-32页 |
·预杂交 | 第32页 |
·杂交 | 第32页 |
·洗膜和显影 | 第32页 |
·用构建好的载体转染BmN 细胞 | 第32页 |
参考文献 | 第32-34页 |
第四章 基于piggyBac 转座子的泥鳅转基因初探 | 第34-41页 |
1 材料和方法 | 第35-36页 |
·材料 | 第35页 |
·方法 | 第35-36页 |
2 结果 | 第36-39页 |
·卵子的受精率和孵化率 | 第36页 |
·转基因幼鱼初步筛选 | 第36-37页 |
·PCR 法检测转基因泥鳅 | 第37-38页 |
·斑点杂交法检测转基因泥鳅 | 第38-39页 |
3 讨论 | 第39页 |
参考文献 | 第39-41页 |
第五章 团头鲂β-actin 启动子驱动的DsRed 表达元件构建与活性研究 | 第41-53页 |
1 材料 | 第42页 |
·材料与试剂 | 第42页 |
2 方法 | 第42-45页 |
·基因组DNA 提取 | 第42页 |
·团头鲂β-actin 启动子的克隆与测序 | 第42-43页 |
·序列分析 | 第43页 |
·转基因载体PigA3GFP-promoter-DsRed–PolyA 的构建 | 第43页 |
·家蚕BmN 细胞的培养和转染 | 第43-45页 |
3 结果与分析 | 第45-50页 |
·团头鲂β-actin 启动子片段的克隆 | 第45页 |
·团头鲂β-actin 启动子片段序列分析 | 第45-47页 |
·同源性分析 | 第47-48页 |
·启动子区域的单链二级结构分析 | 第48页 |
·转基因载体的鉴定 | 第48-49页 |
·转基因载体PigA3GFP-promoter-DsRed–PolyA 在BmN 细胞中的表达 | 第49-50页 |
4 讨论 | 第50-51页 |
参考文献 | 第51-53页 |
结论 | 第53-54页 |
附录 | 第54-56页 |
致谢 | 第56页 |