| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-11页 |
| 主要符号表 | 第11-13页 |
| 绪论 | 第13-14页 |
| 第一部分 文献综述 | 第14-24页 |
| 一 GM-CSF 研究动态 | 第14-16页 |
| 1. GM-CSF 的概念和分类 | 第14页 |
| 2. GM-CSF 的产生和调节 | 第14-15页 |
| 3. GM-CSF 的生物学功能 | 第15页 |
| 4. GM-CSF 的应用 | 第15-16页 |
| 二 奶牛乳房炎概况 | 第16-20页 |
| 1 奶牛乳房炎的发病类型与症状 | 第16页 |
| 2 乳房炎的诊断方法 | 第16-17页 |
| 3 奶牛乳房炎发病主要原因 | 第17-18页 |
| 4 奶牛乳房炎的防治研究现状 | 第18-20页 |
| 三 细胞因子方法治疗乳房炎的研究动态 | 第20-22页 |
| 1 细胞因子在兽医临床上的研究与应用 | 第20-21页 |
| 2 细胞因子在治疗奶牛乳房炎中的研究与应用 | 第21-22页 |
| 四 存在的问题 | 第22页 |
| 五 本试验研究意义 | 第22-24页 |
| 第二部分 试验部分 | 第24-59页 |
| 试验一 奶牛GM-CSF 的克隆、表达 | 第24-40页 |
| 1. 材料与方法 | 第24-32页 |
| ·细胞及载体 | 第24页 |
| ·菌株及主要试剂 | 第24页 |
| ·主要仪器设备 | 第24页 |
| ·引物设计与合成 | 第24-25页 |
| ·脂多糖诱导绵羊肺泡巨噬细胞试验 | 第25页 |
| ·RNA 的提取与反转录PCR | 第25-26页 |
| ·基因克隆与鉴定 | 第26-28页 |
| ·奶牛GM-CSF 表达载体的构建 | 第28-32页 |
| 2. 结果及分析 | 第32-38页 |
| ·提取总RNA 进行RT-PCR | 第32页 |
| ·含pGEM–T-GM-CSF 载体质粒的克隆菌PCR 鉴定 | 第32-33页 |
| ·pGEM–T-GM-CSF 载体质粒双酶切鉴定 | 第33页 |
| ·基因序列测定 | 第33-34页 |
| ·基因序列及氨基酸序列的比较并绘制进化树 | 第34-35页 |
| ·含pET32a-GM-CSF 表达载体质粒的克隆菌PCR 鉴定 | 第35页 |
| ·pET32a-GM-CSF 表达载体质粒的双酶切鉴定 | 第35-36页 |
| ·奶牛GM-CSF 基因表达结果 | 第36-37页 |
| ·奶牛GM-CSF 蛋白二级结构与3D 模型构建 | 第37-38页 |
| 3. 讨论 | 第38-40页 |
| 试验二 rboGM-CSF 的变、复性研究与纯化 | 第40-44页 |
| 1. 材料与方法 | 第40-42页 |
| ·菌株 | 第40页 |
| ·主要仪器 | 第40页 |
| ·试剂 | 第40页 |
| ·菌体的诱导与收集 | 第40页 |
| ·菌体的裂解及利用Ni-NTA 蛋白纯化柱纯化蛋白 | 第40-41页 |
| ·利用包涵体的变性与复性纯化蛋白 | 第41页 |
| ·SDS-PAGE | 第41-42页 |
| 2. 结果 | 第42页 |
| 3. 讨论 | 第42-44页 |
| 试验三 rboGM-CSF 的生物学活性检测 | 第44-50页 |
| 1. 材料与方法 | 第44-45页 |
| ·细胞 | 第44页 |
| ·主要试剂 | 第44页 |
| ·主要仪器 | 第44页 |
| ·MTT 法检测rboGM-CSF 活性 | 第44-45页 |
| ·集落形成试验检测rboGM-CSF 活性 | 第45页 |
| 2. 结果 | 第45-49页 |
| ·淋巴细胞分离结果 | 第45-46页 |
| ·MTT 法检测重组蛋白对淋巴细胞增殖效果 | 第46-47页 |
| ·集落形成试验检测重组生物学蛋白活性 | 第47-49页 |
| 3. 讨论 | 第49-50页 |
| 试验四 rboGM-CSF 结合抗生素治疗奶牛隐性乳房炎试验 | 第50-56页 |
| 1. 材料与方法 | 第50-51页 |
| ·试验材料与主要仪器 | 第50页 |
| ·环境条件 | 第50页 |
| ·试验牛的管理与选择 | 第50页 |
| ·试验方案 | 第50-51页 |
| ·牛奶SCC 计数 | 第51页 |
| 2 结果与分析 | 第51-54页 |
| ·体温与日产奶量 | 第51-53页 |
| ·SCC 计数 | 第53-54页 |
| 3. 讨论 | 第54-56页 |
| 试验五 rboGM-CSF 结合中药治疗奶牛亚急性临床型乳房炎 | 第56-59页 |
| 1. 材料与方法 | 第56-57页 |
| ·试验牛的管理 | 第56页 |
| ·环境条件 | 第56页 |
| ·试验材料与主要仪器 | 第56页 |
| ·试验方案 | 第56-57页 |
| 2. 结果与分析 | 第57-58页 |
| ·体温变化情况 | 第57页 |
| ·SCC 计数 | 第57-58页 |
| 3. 讨论 | 第58-59页 |
| 论文结论 | 第59-60页 |
| 创新点 | 第60-62页 |
| 参考文献 | 第62-68页 |
| 附录一 相关试剂配制 | 第68-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 石河子大学硕士研究生学位论文导师评阅表 | 第72-73页 |
| 个人简历及发表论文 | 第73页 |
