| 提要 | 第1-10页 |
| 英文缩略词 | 第10-12页 |
| 第1章 前言 | 第12-37页 |
| ·结核病的流行病学 | 第12-13页 |
| ·结核分枝杆菌的致病性 | 第13-16页 |
| ·结核分枝杆菌简介 | 第13页 |
| ·结核分枝杆菌的致病物质以及致病机理 | 第13-16页 |
| ·结核分枝杆菌的致病物质 | 第14-15页 |
| ·结核分枝杆菌的致病机理 | 第15-16页 |
| ·机体对结核分枝杆菌的免疫机理 | 第16-23页 |
| ·固有免疫 | 第16-17页 |
| ·巨噬细胞（Macrophage） | 第16-17页 |
| ·中性粒细胞（Neutrophils） | 第17页 |
| ·自然杀伤细胞（NK cells） | 第17页 |
| ·Toll样受体（Toll like receptor, TLR） | 第17页 |
| ·获得性免疫 | 第17-21页 |
| ·体液免疫（Humoral immune response） | 第17-18页 |
| ·细胞免疫（cellular immune response） | 第18-21页 |
| ·结核免疫相关细胞因子 | 第21-23页 |
| ·IL-12 | 第21页 |
| ·IFN-γ | 第21-22页 |
| ·TNF-α | 第22页 |
| ·其他 | 第22-23页 |
| ·结核分枝杆菌基因组的研究 | 第23-24页 |
| ·结核分枝杆菌疫苗进展 | 第24-27页 |
| ·分枝杆菌活疫苗 | 第24-26页 |
| ·亚单位疫苗 | 第26页 |
| ·复合疫苗 | 第26-27页 |
| ·结核分枝杆菌分泌蛋白ESAT-6 和CFP-10 的研究进展 | 第27-35页 |
| ·结核分枝杆菌主要分泌蛋白简介 | 第27-28页 |
| ·早期分泌性抗原靶6 （ESAT-6） | 第27-28页 |
| ·培养滤液蛋白10 （CFP-10） | 第28页 |
| ·其他 | 第28页 |
| ·ESAT-6 和CFP-10 蛋白的生物学功能介绍 | 第28-33页 |
| ·ESAT-6 和CFP-10 蛋白的生化结构特点 | 第29-30页 |
| ·ESAT-6 和CFP-10 蛋白的抗原性特点 | 第30-31页 |
| ·ESAT-6 和CFP-10 的毒力特性 | 第31-33页 |
| ·ESAT-6 及CFP-10 蛋白的应用 | 第33-35页 |
| ·ESAT-6 与CFP-10 在临床诊断中的应用 | 第33-34页 |
| ·基于ESAT-6 和CFP-10 蛋白的疫苗研制 | 第34-35页 |
| ·放线菌素D简介 | 第35页 |
| ·本课题的意义和内容 | 第35-37页 |
| 第2章 结核分枝杆菌rESAT-6 和rCFP-10 的克隆表达、纯化及抗血清制备 | 第37-61页 |
| ·材料 | 第37-38页 |
| ·生化试剂 | 第37页 |
| ·菌种及质粒 | 第37页 |
| ·培养基 | 第37页 |
| ·实验动物及其他 | 第37-38页 |
| ·主要实验设备 | 第38页 |
| ·引物由上海生物工程有限公司合成 | 第38页 |
| ·方法 | 第38-48页 |
| ·MTB基因组的提取 | 第38-39页 |
| ·结核杆菌的复苏和培养 | 第38页 |
| ·结核杆菌的灭活 | 第38页 |
| ·结核杆菌基因组的提取 | 第38-39页 |
| ·ESAT-6 和CFP-10 基因的克隆及表达 | 第39-43页 |
| ·ESAT-6 和CFP-10 的引物设计 | 第39页 |
| ·ESAT-6 和CFP-10 的PCR扩增及电泳鉴定 | 第39-40页 |
| ·ESAT-6 和CFP-10 的T-A克隆及鉴定 | 第40-41页 |
| ·ESAT-6 和CFP-10 基因的亚克隆及表达 | 第41-43页 |
| ·rESAT-6 和rCFP-10 的纯化 | 第43-46页 |
| ·准备工作 | 第43-44页 |
| ·超声裂菌 | 第44页 |
| ·重组蛋白的镍亲和层析纯化 | 第44页 |
| ·凝胶过滤层析 | 第44-45页 |
| ·阴离子交换层析 | 第45页 |
| ·蛋白质鉴定 | 第45-46页 |
| ·蛋白质的二聚化 | 第46页 |
| ·rESAT-6 和rCFP-10 阳性血清的制备 | 第46-48页 |
| ·动物免疫 | 第47页 |
| ·间接Elisa法检测血清抗体滴度 | 第47-48页 |
| ·结果 | 第48-61页 |
| ·结核分枝杆菌ESAT-6 和CFP-10 基因的获得 | 第48-49页 |
| ·结核分枝杆菌的培养 | 第48页 |
| ·结核分枝杆菌基因组的提取 | 第48-49页 |
| ·结核分枝杆菌ESAT-6 和CFP-10 基因的PCR扩增 | 第49页 |
| ·ESAT-6 和CFP-10 基因的克隆、表达及鉴定 | 第49-57页 |
| ·ESAT-6 和CFP-10 基因的克隆及酶切鉴定 | 第49-50页 |
| ·ESAT-6 和CFP-10 在大肠杆菌中的分泌型表达 | 第50-52页 |
| ·ESAT-6 和CFP-10 在大肠杆菌中的细胞内表达 | 第52-57页 |
| ·rESAT-6 和rCFP-10 的纯化及二聚体化 | 第57-59页 |
| ·rESAT-6 和rCFP-10 的纯化 | 第57-58页 |
| ·rESAT-6 和rCFP-10 的浓度、内毒素含量测定及二聚体化 | 第58-59页 |
| ·抗rESAT-6 和rCFP-10 阳性血清的制备 | 第59-61页 |
| 第3章 结核分枝杆菌rESAT-6 和rCFP-10 的生物学功能研究 | 第61-77页 |
| ·材料 | 第61-62页 |
| ·生化试剂 | 第61页 |
| ·细胞株 | 第61页 |
| ·培养基 | 第61页 |
| ·主要实验设备 | 第61-62页 |
| ·引物 | 第62页 |
| ·实验主要方法 | 第62-68页 |
| ·细胞计数法 | 第62页 |
| ·MTT 法 | 第62-63页 |
| ·结晶紫法 | 第63页 |
| ·用RAW264.7-L929 细胞系检测rESAT-6 和rCFP-10 对TNF-α产生的影响 | 第63-64页 |
| ·实验体系的建立及优化 | 第63-64页 |
| ·蛋白刺激RAW264. 7 细胞上清的收集及对RAW264.7细胞生长的影响 | 第64页 |
| ·TNF-α活性检测 | 第64页 |
| ·RT-PCR的方法检测rESAT-6 和rCFP-10 对RAW264.7 中TNF-α以及IFN-γmRNA表达水平的影响 | 第64-65页 |
| ·蛋白和LPS刺激RAW264.7 细胞 | 第64页 |
| ·逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR） | 第64-65页 |
| ·MTT法检测rESAT-6 和rCFP-10 对放线菌素D的作用的影响 | 第65-66页 |
| ·实验体系的建立及优化 | 第66页 |
| ·蛋白对放线菌素D的拮抗作用 | 第66页 |
| ·MTT法检测rESAT-6 和rCFP-10 对小鼠脾细胞生长的影响 | 第66-67页 |
| ·脾细胞的分离及培养 | 第66-67页 |
| ·蛋白对脾细胞的刺激 | 第67页 |
| ·统计分析 | 第67-68页 |
| ·结果 | 第68-77页 |
| ·rESAT-6 和rCFP-10 对RAW264.7 细胞生长的影响 | 第68页 |
| ·L929 杀伤实验检测rESAT-6 和rCFP-10 对TNF-α分泌的影响 | 第68-71页 |
| ·实验体系的优化结果 | 第68-70页 |
| ·rESAT-6 和rCFP-10 对RAW264.7 细胞TNF-α分泌的影响 | 第70-71页 |
| ·用RT-PCR方法来检测rESAT-6 和rCFP-10 对RAW264.7 细胞TNF-αmRNA表达的影响 | 第71-72页 |
| ·RT-PCR方法来检测rESAT-6 和rCFP-10 对RAW264.7 细胞IFN-γmRNA表达的影响 | 第72-73页 |
| ·rESAT-6 对放线菌素D的抑制作用 | 第73-75页 |
| ·rESAT-6 对放线菌素D的抑制作用的证实 | 第73页 |
| ·实验体系的优化结果 | 第73-74页 |
| ·rESAT-6 拮抗放线菌素D的最佳剂量 | 第74-75页 |
| ·rESAT-6 和rCFP-10 对脾细胞生长的影响 | 第75-77页 |
| 第4章 讨论 | 第77-86页 |
| ·rESAT-6 和rCFP-10 的原核表达 | 第77-78页 |
| ·rESAT-6 和rCFP-10 的纯化 | 第78-80页 |
| ·制备抗rESAT-6 和rCFP-10 阳性血清的意义 | 第80页 |
| ·rESAT-6 和rCFP-10 对细胞因子表达的调节作用 | 第80-82页 |
| ·rESAT-6 和rCFP-10 与TNF-α表达 | 第80-82页 |
| ·rESAT-6 和rCFP-10 与IFN-γ表达 | 第82页 |
| ·rESAT-6 拮抗actD诱导细胞死亡的作用及其机制分析 | 第82-84页 |
| ·rESAT-6 和rCFP-10 的其他一些功能研究 | 第84页 |
| ·展望 | 第84-86页 |
| 结论 | 第86-87页 |
| 参考文献 | 第87-103页 |
| 攻读学位期间取得的科研成果 | 第103-104页 |
| 致谢 | 第104-105页 |
| 中文摘要 | 第105-108页 |
| ABSTRACT | 第108-110页 |
