| 中文摘要 | 第1-9页 |
| 英文摘要 | 第9-19页 |
| 英文缩写注释 | 第19-21页 |
| 前言 | 第21-24页 |
| 技术路线 | 第24-27页 |
| 第一章 缺血-再灌注损伤对大鼠心肌中核仁素表达的影响 | 第27-42页 |
| ·材料与方法 | 第27-32页 |
| ·材料 | 第27-28页 |
| ·主要材料和试剂 | 第27-28页 |
| ·主要仪器 | 第28页 |
| ·方法 | 第28-32页 |
| ·大鼠心肌缺血-再灌注损伤动物模型的建立 | 第28页 |
| ·活性氧含量测定 | 第28-29页 |
| ·caspase-3活性检测 | 第29页 |
| ·TUNEL | 第29-30页 |
| ·DNA-Ladder的检测 | 第30页 |
| ·RNA的提取及逆转录聚合酶链反应(RT-PCR) | 第30-31页 |
| ·免疫印迹分析(Western blot) | 第31页 |
| ·统计学分析 | 第31-32页 |
| ·结果 | 第32-40页 |
| ·大鼠心肌缺血-再灌注损伤动物模型的构建 | 第32-33页 |
| ·大鼠心肌缺血-再灌注损伤对血清心肌酶学的影响 | 第32页 |
| ·大鼠心肌缺血-再灌注损伤对心肌活性氧产生的影响 | 第32-33页 |
| ·缺血-再灌注损伤对大鼠心肌细胞凋亡发生的影响 | 第33-37页 |
| ·大鼠心肌缺血-再灌注损伤对心肌caspase-3活性的影响 | 第33-34页 |
| ·采用TUNEL检测大鼠心肌缺血-再灌注损伤对心肌细胞凋亡发生的影响 | 第34-36页 |
| ·采用DNA-Ladder检测大鼠心肌缺血-再灌注损伤对心肌细胞凋亡发生的影响 | 第36-37页 |
| ·大鼠心肌缺血-再灌注损伤模型中核仁素的表达情况 | 第37-40页 |
| ·RT-PCR检测大鼠心肌缺血-再灌注损伤对核仁素mRNA表达的影响 | 第37-38页 |
| ·采用Western blot检测大鼠心肌缺血-再灌注损伤对核仁素蛋白质表达的影响 | 第38-40页 |
| ·分析和讨论 | 第40-41页 |
| ·结论 | 第41-42页 |
| 第二章 核仁素在H_2O_2所致大鼠心肌细胞凋亡中的作用 | 第42-61页 |
| ·材料与方法 | 第43-47页 |
| ·材料 | 第43页 |
| ·主要材料和试剂 | 第43页 |
| ·主要仪器 | 第43页 |
| ·方法 | 第43-47页 |
| ·大鼠心肌细胞的分离和培养 | 第44页 |
| ·过氧化氢(H_2O_2)处理 | 第44页 |
| ·实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR) | 第44-45页 |
| ·免疫印迹分析(Western blot) | 第45页 |
| ·免疫荧光细胞化学技术 | 第45-46页 |
| ·细胞核蛋白和胞浆组分的分离 | 第46页 |
| ·脂质体瞬时转染 | 第46页 |
| ·caspase-3活性检测 | 第46页 |
| ·流式细胞术 | 第46-47页 |
| ·统计学分析 | 第47页 |
| ·结果 | 第47-58页 |
| ·核仁素在H_2O_2所致大鼠心肌细胞凋亡中的时空表达模式 | 第47-50页 |
| ·Real-time PCR检测H_2O_2对心肌细胞中核仁素mRNA表达的影响 | 第47-48页 |
| ·Western blot检测H_2O_2对心肌细胞中核仁素蛋白质表达的影响 | 第48-49页 |
| ·细胞免疫荧光、细胞成分分离检测H_2O_2对心肌细胞核仁素定位的影响 | 第49-50页 |
| ·核仁素过表达对H_2O_2所致大鼠心肌细胞凋亡的影响 | 第50-54页 |
| ·核仁素过表达 | 第50-51页 |
| ·核仁素过表达对H_2O_2所致大鼠心肌细胞caspase-3活性的影响 | 第51-52页 |
| ·核仁素过表达对H_2O_2所致大鼠心肌细胞凋亡发生的影响 | 第52-54页 |
| ·内源性核仁素表达抑制对H_2O_2所致大鼠心肌细胞凋亡的影响 | 第54-58页 |
| ·内源性核仁素表达抑制 | 第54-56页 |
| ·内源性核仁素表达抑制对H_2O_2所致大鼠心肌细胞caspase-3活性的影响 | 第56-57页 |
| ·内源性核仁素表达抑制对H_2O_2所致大鼠心肌细胞凋亡发生的影响 | 第57-58页 |
| ·分析和讨论 | 第58-60页 |
| ·结论 | 第60-61页 |
| 第三章 核仁素抗心肌细胞凋亡的机制研究 | 第61-89页 |
| ·材料与方法 | 第62-67页 |
| ·材料 | 第62-63页 |
| ·主要材料和试剂 | 第62-63页 |
| ·主要仪器 | 第63页 |
| ·方法 | 第63-67页 |
| ·大鼠心肌细胞的分离和培养 | 第63-64页 |
| ·脂质体转染 | 第64页 |
| ·免疫印迹分析(Western blot) | 第64-65页 |
| ·caspase-3活性检测 | 第65页 |
| ·流式细胞仪分析 | 第65页 |
| ·H_2O_2处理 | 第65页 |
| ·mRNA稳定性分析 | 第65页 |
| ·Real-time PCR分析 | 第65-66页 |
| ·IP-RT-PCR | 第66-67页 |
| ·统计学分析 | 第67页 |
| ·结果 | 第67-86页 |
| ·核仁素不同结构域对H_2O_2所致大鼠心肌细胞凋亡的影响 | 第67-71页 |
| ·核仁素不同结构域突变体过表达 | 第67-68页 |
| ·核仁素全长及核仁素不同结构域突变体过表达对H_2O_2所致大鼠心肌细胞caspase-3活性的影响 | 第68-69页 |
| ·核仁素全长及核仁素不同结构域突变体过表达对H_2O_2所致大鼠心肌细胞凋亡发生的影响 | 第69-71页 |
| ·核仁素及其不同结构域对凋亡相关基因Bcl-2、Bax表达的影响 | 第71-75页 |
| ·正常状态下核仁素及其不同结构域对凋亡相关基因Bcl-2、Bax表达水平的影响 | 第72-73页 |
| ·氧化应激下核仁素及其不同结构域对凋亡相关基因Bcl-2、Bax表达水平的影响 | 第73-75页 |
| ·核仁素及其不同结构域对凋亡相关基因Bcl-2、Bax mRNA稳定性的影响 | 第75-84页 |
| ·H_2O_2对心肌细胞中Bcl-2 mRNA稳定性的影响 | 第75-76页 |
| ·核仁素及其氨基端结构域对对Bcl-2 mRNA稳定性的影响 | 第76-79页 |
| ·内源性核仁素表达抑制对Bcl-2 mRNA稳定性的影响 | 第76-77页 |
| ·核仁素过表达对H_2O_2所致心肌细胞中Bcl-2 mRNA稳定性的影响 | 第77-78页 |
| ·核仁素氨基端结构域(AAl-309)过表达对H_2O_2所致心肌细胞中Bcl-2mRNA稳定性的影响 | 第78-79页 |
| ·H_2O_2处理对心肌细胞中Bax mRNA稳定性的影响 | 第79-80页 |
| ·核仁素及其不同结构域对对Bax mRNA稳定性的影响 | 第80-84页 |
| ·内源性核仁素表达抑制对Bax mRNA稳定性的影响 | 第80-81页 |
| ·核仁素过表达对H_2O_2所致Bax mRNA稳定性的影响 | 第81-82页 |
| ·核仁素不同结构域过表达对Bax mRNA稳定性的影响 | 第82-84页 |
| ·核仁素与凋亡相关基因Bcl-2、Bax mRNA的相互作用 | 第84-86页 |
| ·核仁素与Bcl-2 mRNA的相互作用 | 第84-85页 |
| ·核仁素与Bax mRNA的相互作用 | 第85-86页 |
| ·分析和讨论 | 第86-88页 |
| ·结论 | 第88-89页 |
| 总结论 | 第89-90页 |
| 参考文献 | 第90-99页 |
| 综述 | 第99-118页 |
| 致谢 | 第118-119页 |
| 攻读学位期间主要成果 | 第119-120页 |
