| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 缩略词表 | 第8-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-33页 |
| 1.1 低温对植物的影响 | 第13-15页 |
| 1.1.1 冷害对植物的伤害机制 | 第13-14页 |
| 1.1.2 冻害对植物的伤害机制 | 第14-15页 |
| 1.2 植物响应低温的信号通路 | 第15-31页 |
| 1.2.1 冷驯化 | 第15-17页 |
| 1.2.2 豆科植物冷驯化的研究进展 | 第17-19页 |
| 1.2.3 植物对低温的感知 | 第19-20页 |
| 1.2.4 依赖于CBF的信号途径 | 第20-28页 |
| 1.2.5 不依赖于CBF的信号途径 | 第28-31页 |
| 1.3 本研究的目的与意义 | 第31-33页 |
| 第二章 材料与方法 | 第33-55页 |
| 2.1 实验材料 | 第33-34页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第33页 |
| 2.1.2 菌株材料 | 第33页 |
| 2.1.3 载体 | 第33-34页 |
| 2.1.4 常用酶及试剂 | 第34页 |
| 2.1.5 植物培养材料 | 第34页 |
| 2.2 常用溶液及培养基 | 第34-39页 |
| 2.2.1 常用溶液 | 第34-35页 |
| 2.2.2 常用培养基配制 | 第35-37页 |
| 2.2.3 酵母双杂交实验相关缓冲液 | 第37页 |
| 2.2.4 His标签融合蛋白纯化相关缓冲液 | 第37页 |
| 2.2.5 GST标签融合蛋白纯化相关缓冲液 | 第37页 |
| 2.2.6 Western blot相关缓冲液 | 第37-38页 |
| 2.2.7 染色质免疫共沉淀相关缓冲液 | 第38-39页 |
| 2.3 实验方法 | 第39-54页 |
| 2.3.0 常规分子克隆及检测方法 | 第39-41页 |
| 2.3.1 CTAB法提取植物基因组DNA | 第41页 |
| 2.3.2 TRIzol法提取植物总RNA | 第41-42页 |
| 2.3.3 反转录合成cDNA | 第42页 |
| 2.3.4 转录组测序分析 | 第42-43页 |
| 2.3.5 荧光定量PCR | 第43页 |
| 2.3.6 根癌农杆菌电击法感受态细胞制备 | 第43-44页 |
| 2.3.7 农杆菌电击法转化方法 | 第44页 |
| 2.3.8 截形苜蓿R108遗传转化 | 第44-45页 |
| 2.3.9 截形苜蓿冻处理实验 | 第45页 |
| 2.3.10 离子渗漏率测定 | 第45-46页 |
| 2.3.11 烟草叶片瞬时表达蛋白 | 第46页 |
| 2.3.12 酵母双杂交实验 | 第46-47页 |
| 2.3.13 His标签融合蛋白的原核表达及纯化 | 第47-48页 |
| 2.3.14 GST标签融合蛋白的原核表达及纯化 | 第48页 |
| 2.3.15 GST-pull down实验 | 第48-49页 |
| 2.3.16 蛋白质免疫印迹(Western blot) | 第49-50页 |
| 2.3.17 凝胶阻滞电泳EMSA | 第50-51页 |
| 2.3.18 多克隆抗体制备 | 第51-52页 |
| 2.3.19 染色质免疫共沉淀ChIP | 第52-54页 |
| 2.4 实验仪器 | 第54-55页 |
| 第三章 实验结果与分析 | 第55-77页 |
| 3.1 MtCBF4正调控截形苜蓿对冷的耐受能力 | 第55-59页 |
| 3.1.1 过表达MtCBF4转基因植株及突变体的获得 | 第55-57页 |
| 3.1.2 过表达MtCBF4提高截形苜蓿对冷的耐受能力 | 第57-58页 |
| 3.1.3 cbf4突变体表现为冷敏感表型 | 第58-59页 |
| 3.2 MtCBF4的下游基因分析 | 第59-64页 |
| 3.2.1 转录组测序结果分析 | 第59页 |
| 3.2.2 MtCBF4正调控抗冷相关基因的表达 | 第59-61页 |
| 3.2.3 MtCBF4直接调控MtCAS15 | 第61-64页 |
| 3.3 MtMYB3负调控截形苜蓿对冷的耐受能力 | 第64-67页 |
| 3.3.1 过表达MtMYB3转基因苜蓿抗冷能力下降 | 第64-65页 |
| 3.3.2 myb3突变体抗冷能力提高 | 第65-67页 |
| 3.4 MtMYB61正调控截形苜蓿对冷的耐受能力 | 第67-72页 |
| 3.4.1 过表达MtMYB61转基因苜蓿抗冷能力提高 | 第67-69页 |
| 3.4.2 myb61突变体抗冷能力下降 | 第69-72页 |
| 3.5 MtMYB61影响MtMYB3结合MtCBF4的启动子 | 第72-75页 |
| 3.5.1 EMSA实验证明MtMYB61影响MtMYB3结合MtCBF4的启动子 | 第72-73页 |
| 3.5.2 烟草系统中验证MtMYB61影响MtMYB3结合MtCBF4的启动子 | 第73-75页 |
| 3.6 冷胁迫条件下MtMYB61解除MtMYB3对MtCBF4的抑制 | 第75-77页 |
| 3.6.1 MtMYB61、MtMYB3、MtCBF4、MtCAS15在低温条件下的表达模式 | 第75页 |
| 3.6.2 ChIP实验证明低温条件下MtMYB61影响MtMYB3结合MtCBF4的启动子 | 第75-77页 |
| 第四章 讨论与展望 | 第77-81页 |
| 4.1 MtCBF4调控多种信号途径 | 第78页 |
| 4.2 MtMYB61和MtMYB3调控MtCBF4的表达 | 第78页 |
| 4.3 非生物胁迫相关的MYB类转录因子的进化树分析 | 第78-80页 |
| 4.4 展望 | 第80-81页 |
| 第五章 结论 | 第81-82页 |
| 参考文献 | 第82-97页 |
| 附录 | 第97-106页 |
| 附录1 论文中所用引物 | 第97-100页 |
| 附录2 EMSA实验所使用的探针序列 | 第100-101页 |
| 附录3 ChIP实验所使用的抗体检测 | 第101-102页 |
| 附录4 截形苜蓿WRKY76参与结瘤信号调控的分子机制初探 | 第102-106页 |
| 附录4.1 引言 | 第102页 |
| 附录4.2 实验方法 | 第102-104页 |
| 附录4.3 实验结果与分析 | 第104-105页 |
| 附录4.4 结论与讨论 | 第105-106页 |
| 致谢 | 第106-107页 |
| 个人简历 | 第107页 |
