| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-9页 |
| 引言 | 第9-11页 |
| 主要的仪器设备和试剂 | 第11-16页 |
| 一 仪器设备 | 第11页 |
| 二 试剂 | 第11-12页 |
| 三 常用缓冲液、培养液等溶液的试剂配方 | 第12-16页 |
| 第一章 葡萄糖调节蛋白78在结直肠癌、腺瘤及相应正常组织中的表达及意义 | 第16-23页 |
| 一 材料与方法 | 第16-19页 |
| 1 免疫组织化学检测GRP78蛋白在结直肠癌中的表达 | 第16-17页 |
| ·研究对象和标本 | 第16页 |
| ·免疫组织化学检测 | 第16-17页 |
| ·结果判断 | 第17页 |
| 2 在mRNA水平上检测GRP78基因的表达水平 | 第17-19页 |
| ·研究对象和标本 | 第17页 |
| ·组织总RNA的提取 | 第17页 |
| ·半定量RT-PCR反应 | 第17-19页 |
| ·反转录反应 | 第17-18页 |
| ·PCR扩增 | 第18-19页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳及结果分析 | 第19页 |
| 3 数据统计分析方法 | 第19页 |
| 二 结果 | 第19-23页 |
| 1 GRP78蛋白在结直肠癌组织中的表达情况 | 第19-21页 |
| ·各组织中GRP78的表达 | 第19-20页 |
| ·GRP78表达与结直肠癌临床病理特征的关系 | 第20-21页 |
| 2 在mRNA水平上,GRP78基因在结直肠癌不同组织中的表达情况 | 第21-23页 |
| 第二章 利用RNA干扰技术抑制大肠癌细胞系葡萄糖调节蛋白78的表达 | 第23-30页 |
| 一 材料与方法 | 第23-27页 |
| 1 shRNA质粒表达载体的构建 | 第23页 |
| 2 细胞培养 | 第23-25页 |
| ·实验细胞 | 第23页 |
| ·细胞装运 | 第23页 |
| ·细胞传代 | 第23-24页 |
| ·细胞冻存 | 第24页 |
| ·细胞复苏 | 第24-25页 |
| 3 转染 | 第25页 |
| ·实验分组 | 第25页 |
| ·转染步骤 | 第25页 |
| 4 基因抑制效率的检测 | 第25-27页 |
| ·采用半定量RT-PCR,在mRNA水平上检测转染前后GRP78的表达改变 | 第25-26页 |
| ·细胞总RNA的提取 | 第25-26页 |
| ·半定量RT-PCR反应 | 第26页 |
| ·采用Western blot,在蛋白水平上检测转染前后GRP78的表达改变 | 第26-27页 |
| ·单层贴壁细胞总蛋白的提取 | 第26页 |
| ·Braford法蛋白定量 | 第26页 |
| ·Western blot步骤 | 第26-27页 |
| 5 数据统计分析方法 | 第27页 |
| 二 结果 | 第27-30页 |
| 1 在mRNA水平上,转染前后GRP78在RKO细胞系中的表达变化 | 第27-28页 |
| 2 在蛋白水平上,转染前后GRP78在RKO细胞系中的表达变化 | 第28-30页 |
| 讨论 | 第30-34页 |
| 结论 | 第34-35页 |
| 参考文献 | 第35-40页 |
| 附图 | 第40-48页 |
| 综述 | 第48-59页 |
| 参考文献 | 第53-59页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第59-60页 |
| 缩略语 | 第60-61页 |
| 致谢 | 第61-63页 |
