| 致谢 | 第1-4页 |
| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 第一章 引言 | 第9-21页 |
| 1 植物的衰老 | 第9-14页 |
| ·叶片衰老与叶绿素降解 | 第9-11页 |
| ·叶绿素降解与滞绿 | 第11-12页 |
| ·叶绿素降解代谢相关基因 | 第12-13页 |
| ·AtCRN1 研究进展 | 第13-14页 |
| 2 RACE 技术概述 | 第14-19页 |
| ·3’RACE 的原理 | 第14-15页 |
| ·5’RACE 的原理 | 第15-18页 |
| ·环化法 | 第15页 |
| ·末端脱氧核糖核酸转移酶法 | 第15-17页 |
| ·SMART 反转录酶法 | 第17-18页 |
| ·RACE 技术应用现状 | 第18-19页 |
| 3 竹类植物转基因技术研究现状 | 第19页 |
| 4 研究目的和意义 | 第19-21页 |
| 第二章 AtCRN1 同源基因BeCRN1 的分离 | 第21-39页 |
| 1 材料和试剂 | 第21页 |
| ·植物材料 | 第21页 |
| ·菌种与载体 | 第21页 |
| ·细菌培养基 | 第21页 |
| ·生物试剂 | 第21页 |
| 2 实验内容与方法 | 第21-31页 |
| ·金丝慈竹RNA 提取、检测以及定量 | 第21-22页 |
| ·RNA 的提取 | 第21-22页 |
| ·RNA 质量检测 | 第22页 |
| ·RNA 定量 | 第22页 |
| ·用RT-PCR 方法获得 BeCRN1 基因三段保守片段 | 第22-26页 |
| ·cDNA 第一链合成和反转录 PCR（RT-PCR） | 第22-23页 |
| ·BeCRN1 基因三段保守片段的获得 | 第23-26页 |
| ·用RACE 法扩增 BeCRN1 基因的3’末端序列 | 第26-28页 |
| ·3’RACE ready cDNA 的合成 | 第27页 |
| ·BeCRN1 3’端扩增的 PCR 体系 | 第27-28页 |
| ·用RACE 法扩增 BeCRN1 基因的5’末端序列 | 第28-30页 |
| ·第一链cDNA 的合成 | 第29页 |
| ·Hybrid RNA 的分解 | 第29页 |
| ·连接反应 | 第29页 |
| ·两轮 PCR 扩增 | 第29-30页 |
| ·cDNA 全长克隆 | 第30-31页 |
| 3 实验结果与讨论 | 第31-39页 |
| ·引物寻找结果 | 第31-32页 |
| ·金丝慈竹叶片总RNA 提取 | 第32-33页 |
| ·RNA 质量检测结果 | 第32-33页 |
| ·RNA 定量结果 | 第33页 |
| ·BeCRN1 基因全长cDNA 序列的获得 | 第33-39页 |
| ·三段保守序列的获得 | 第33页 |
| ·3’RACE 结果 | 第33-35页 |
| ·5’RACE 结果 | 第35-36页 |
| ·全长序列的获得 | 第36-39页 |
| 第三章 BeCRN1 基因和蛋白序列的生物信息学分析 | 第39-44页 |
| 1 研究方法和内容 | 第39页 |
| 2 研究结果与讨论 | 第39-44页 |
| ·BeCRN1 一级结构序列分析 | 第39-40页 |
| ·BeCRN1 的亚细胞定位 | 第40-41页 |
| ·BeCRN1 的多序列比对 | 第41-42页 |
| ·BeCRN1 的系统进化树分析 | 第42-44页 |
| 第四章 植物表达载体pCHF3-BeCRN1 的构建 | 第44-48页 |
| 1 材料与试剂 | 第44页 |
| ·菌株和质粒 | 第44页 |
| ·培养基 | 第44页 |
| ·主要试剂 | 第44页 |
| 2 实验内容与方法 | 第44-47页 |
| ·植物表达载体pCHF3- BeCRNI 的构建 | 第44-46页 |
| ·质粒pCHF3 的抽提 | 第44-45页 |
| ·酶切质粒并回收大片段 | 第45页 |
| ·带酶切位点的目的片段 BeCRN1 的获得 | 第45页 |
| ·表达载体pCHF3- BeCRN1 的构建 | 第45-46页 |
| ·将表达载体pCHF3- BeCRN1 转入 Top10 菌株 | 第46页 |
| ·植物表达载体pCHF3-BeCRN1 转化 GV3101 | 第46-47页 |
| ·农杆菌感受态制备 | 第46页 |
| ·冻融法转化 GV3101 | 第46-47页 |
| 3 实验结果 | 第47-48页 |
| 第五章 金丝慈竹遗传转化初步研究 | 第48-54页 |
| 1 实验材料和试剂 | 第48-49页 |
| ·植物材料 | 第48页 |
| ·菌株和质粒 | 第48页 |
| ·实验所用培养基 | 第48-49页 |
| ·实验所用试剂 | 第49页 |
| 2 实验内容和方法 | 第49-50页 |
| ·金丝慈竹遗传转化体系的建立 | 第49页 |
| ·愈伤组织的诱导 | 第49页 |
| ·愈伤组织的增殖 | 第49页 |
| ·农杆菌LBA4404 浸染液的制备 | 第49-50页 |
| ·农杆菌浸染金丝慈竹愈伤和共培养 | 第50页 |
| ·GUS 基因表达的组织化学法检测 | 第50页 |
| ·愈伤组织对不同抗生素的敏感性测试 | 第50页 |
| 3 实验结果与讨论 | 第50-54页 |
| ·农杆菌侵染结果 | 第50-51页 |
| ·抗生素敏感性测试结果 | 第51-54页 |
| 第六章 总结及展望 | 第54-55页 |
| 1 结论 | 第54页 |
| 2 论文不足之处 | 第54页 |
| 3 展望 | 第54-55页 |
| 附录 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-61页 |
| 详细摘要 | 第61-64页 |
