| 中文摘要 | 第1-6页 |
| 英文摘要 | 第6-13页 |
| 1 绪论 | 第13-31页 |
| ·研究背景 | 第13-27页 |
| ·生物农药在有害生物的防治中的作用 | 第13-14页 |
| ·昆虫病原真菌侵染寄主的致病机理研究进展 | 第14-21页 |
| ·昆虫病原真菌工程菌的研究进展 | 第21-22页 |
| ·疏水蛋白研究进展 | 第22-26页 |
| ·昆虫病原真菌遗传转化的研究进展 | 第26-27页 |
| ·研究内容和意义 | 第27-29页 |
| ·技术路线 | 第29页 |
| ·本研究的创新性 | 第29-31页 |
| 2 球孢白僵菌高效稳定遗传转化标记的筛选 | 第31-45页 |
| ·材料 | 第31-33页 |
| ·菌株 | 第31页 |
| ·载体 | 第31-32页 |
| ·培养基 | 第32页 |
| ·生物化学试剂 | 第32页 |
| ·主要仪器设备 | 第32页 |
| ·主要缓冲液配方 | 第32页 |
| ·供试昆虫 | 第32-33页 |
| ·方法 | 第33-37页 |
| ·菌株培养及分生孢子悬浮液制备 | 第33页 |
| ·真菌DNA 小量提取 | 第33页 |
| ·真菌DNA 大量提取 | 第33页 |
| ·遗传转化标记的筛选 | 第33页 |
| ·基于sur 筛选标记的真菌表达载体pSUR-eGFP 的构建 | 第33-35页 |
| ·球孢白僵菌芽生孢子感受态细胞制备和转化 | 第35-36页 |
| ·培养基pH 对转化效率的影响 | 第36页 |
| ·不同保存时间对感受态转化效率的影响 | 第36页 |
| ·转化子的PCR 分析 | 第36页 |
| ·转化子的Southern 杂交分析 | 第36-37页 |
| ·转化子的遗传稳定性分析 | 第37页 |
| ·结果与分析 | 第37-42页 |
| ·遗传转化标记的筛选 | 第37-38页 |
| ·pH 对转化效率的影响 | 第38-39页 |
| ·转化子的分子验证 | 第39-41页 |
| ·保存时间对转化效率的影响 | 第41-42页 |
| ·讨论 | 第42页 |
| ·小结 | 第42-45页 |
| 3 疏水蛋白基因的克隆与功能分析 | 第45-89页 |
| ·材料 | 第45-46页 |
| ·菌株 | 第45页 |
| ·载体 | 第45页 |
| ·主要培养基配方 | 第45页 |
| ·主要化学试剂 | 第45-46页 |
| ·主要仪器设备 | 第46页 |
| ·主要缓冲液配方 | 第46页 |
| ·供试昆虫 | 第46页 |
| ·方法 | 第46-61页 |
| ·分生孢子 | 第46页 |
| ·芽生孢子(Blastospore) | 第46页 |
| ·微循环孢子(Submerged conidia) | 第46页 |
| ·虫菌体的制备 | 第46-47页 |
| ·真菌DNA 提取 | 第47页 |
| ·真菌RNA 的提取 | 第47页 |
| ·真菌感受态细胞制备和转化 | 第47页 |
| ·疏水蛋白基因hyd1 和hyd2 侧翼序列的克隆 | 第47页 |
| ·hyd1 和hyd2 敲除载体的构建 | 第47-51页 |
| ·双敲除载体的构建 | 第51页 |
| ·互补载体的构建 | 第51页 |
| ·hyd1 和hyd2 融合表达标签载体的构建 | 第51-54页 |
| ·hyd1 和hyd2 敲除突变体转化子的筛选 | 第54-55页 |
| ·hyd1 和hyd2 互补菌株的筛选 | 第55页 |
| ·hyd1 和hyd2 双敲除突变体转化子的筛选 | 第55-56页 |
| ·hyd1 和hyd2 融合表达标签菌株的筛选 | 第56页 |
| ·转化子的分子验证 | 第56-57页 |
| ·同源转化子表型分析 | 第57页 |
| ·孢子疏水性测定（MATH） | 第57-58页 |
| ·凝集素结合试验（Lectin binding assay） | 第58-59页 |
| ·孢子对不同介质吸附能力的测定 | 第59页 |
| ·免疫荧光检测疏水蛋白的表达和分布 | 第59-60页 |
| ·扫描电镜（SEM）观察孢子表面特性 | 第60页 |
| ·原子力显微镜（AFM)观察孢子表面特性 | 第60页 |
| ·hyd1 和hyd2 在形成孢子疏水层过程中的相互作用 | 第60页 |
| ·孢子抗逆性和耐热性测试 | 第60-61页 |
| ·生物测定 | 第61页 |
| ·数据的统计和分析 | 第61页 |
| ·实验结果和讨论 | 第61-88页 |
| ·疏水蛋白基因hyd1 和hyd2 侧翼序列的克隆和分析 | 第63页 |
| ·hyd1 和hyd2 敲除载体的构建 | 第63-65页 |
| ·hyd1 和hyd2 敲除菌株的筛选与分子验证 | 第65-67页 |
| ·△hyd1 和△hyd2 互补菌株的筛选 | 第67-68页 |
| ·△hyd1△hyd2 双敲除菌株的筛选 | 第68-71页 |
| ·同源重组转化子表型分析 | 第71-72页 |
| ·孢子疏水性测定 | 第72-73页 |
| ·hyd1 在由液体介导的分生孢子的分散中起重要作用 | 第73-74页 |
| ·hyd1 和hyd2 编码蛋白形成在孢子外壁水疏水层 | 第74-76页 |
| ·免疫荧光分析hyd1 和hyd2 表达谱 | 第76-78页 |
| ·hyd1 和hyd2 在孢子外壁形成中的相互作用分析 | 第78-79页 |
| ·hyd1 和hyd2 在介导对不同底物吸附中的作用 | 第79-80页 |
| ·凝集素结合实验 | 第80-84页 |
| ·Hyd1 和Hyd2 在形成孢子外壁中作用模型 | 第84-85页 |
| ·疏水蛋白在球孢子白僵菌致病中的作用 | 第85-88页 |
| ·小结 | 第88-89页 |
| 4 结论 | 第89-91页 |
| ·球孢白僵菌高效稳定转化子的筛选 | 第89页 |
| ·疏水蛋白基因功能分析 | 第89-91页 |
| 致谢 | 第91-93页 |
| 参考文献 | 第93-105页 |
| 附录 | 第105-110页 |
| A 本文中用到的菌株和质粒 | 第105-106页 |
| B 本文中用到的引物 | 第106-107页 |
| C 文中用到的缩写 | 第107-109页 |
| D 博士学习期间在GenBank 上登录的基因序列 | 第109页 |
| E 博士学习期间发表的文章 | 第109-110页 |
| F 博士期间参与的会议和发表的文章 | 第110页 |
