| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-8页 |
| 1 概论 | 第8-21页 |
| ·大豆生物活性肽和人类健康的关系 | 第8-9页 |
| ·Lunasin 的发现 | 第9页 |
| ·Lunasin 的结构特征 | 第9-10页 |
| ·Lunasin 的研究现状 | 第10-15页 |
| ·Lunasin 的研究和应用前景 | 第15页 |
| ·基因工程技术 | 第15-20页 |
| ·本课题的研究目的及意义 | 第20-21页 |
| 2 材料与仪器 | 第21-26页 |
| ·实验菌株及质粒、细胞 | 第21页 |
| ·培养基与抗生素 | 第21页 |
| ·酶类及主要生化试剂 | 第21-22页 |
| ·DNA 序列 | 第22页 |
| ·主要仪器设备 | 第22-23页 |
| ·常用溶液的配制 | 第23-26页 |
| 3 方法 | 第26-41页 |
| ·重组质粒的设计 | 第26页 |
| ·表达载体的构建、筛选及鉴定 | 第26-33页 |
| ·重组蛋白的诱导表达 | 第33-34页 |
| ·蛋白免疫印迹(Western Blot) 分析 | 第34-35页 |
| ·重组蛋白的可溶性分析 | 第35页 |
| ·重组质粒表达条件的优化 | 第35-37页 |
| ·融合蛋白Lunasin-6His 的纯化 | 第37-38页 |
| ·细胞培养 | 第38-39页 |
| ·Lunasin 生物活性测定 | 第39-41页 |
| 4 结果 | 第41-49页 |
| ·Lunasin 基因的获得 | 第41-42页 |
| ·重组表达载体的构建及鉴定 | 第42-44页 |
| ·融合蛋白的诱导表达 | 第44页 |
| ·Western Blot 鉴定融合蛋白 | 第44-45页 |
| ·重组蛋白的可溶性分析 | 第45页 |
| ·重组蛋白表达条件的优化 | 第45-46页 |
| ·融合蛋白的表达、纯化 | 第46-47页 |
| ·MTT 鉴定细胞活性 | 第47-48页 |
| ·细胞培养基中NO 浓度的检测 | 第48-49页 |
| 5 讨论 | 第49-53页 |
| ·Lunasin 表达的意义 | 第49页 |
| ·Lunasin 基因的获得 | 第49页 |
| ·表达载体的选择 | 第49-51页 |
| ·重组蛋白的可溶性 | 第51页 |
| ·重组蛋白的鉴定及纯化 | 第51-52页 |
| ·重组蛋白诱导表达条件的优化 | 第52页 |
| ·重组蛋白活性的鉴定 | 第52-53页 |
| 6 小结 | 第53-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-60页 |
| 附录1 pUC57-Lunasin 合成测序图 | 第60-61页 |
| 附录2 pET-32a(+)-Lunasin 测序图 | 第61-62页 |
| 附录3 硕士期间发表的文章 | 第62-63页 |
| 附录4 文中所用缩写 | 第63页 |