| 摘要 | 第1-17页 |
| ABSTRACT | 第17-23页 |
| 符号说明 | 第23-24页 |
| 第一章 前言 | 第24-39页 |
| 1. HMBOX1 | 第24-31页 |
| ·Homeobox家族 | 第24-28页 |
| ·HNF家族 | 第28-29页 |
| ·HMBOX1 | 第29-31页 |
| 2. 原核蛋白的表达、纯化和复性 | 第31-35页 |
| ·包涵体的形成 | 第31页 |
| ·包涵体的破菌、分离、洗涤及溶解 | 第31-32页 |
| ·包涵体的复性 | 第32-35页 |
| 3. 单克隆抗体的制备 | 第35-38页 |
| ·细胞因子及共刺激分子类佐剂 | 第35-36页 |
| ·免疫刺激序列基因佐剂 | 第36-37页 |
| ·其他新型佐剂 | 第37-38页 |
| 4. 本课题已有的研究基础 | 第38页 |
| 5. 本课题拟解决的问题 | 第38-39页 |
| 第二章 HMBOX1重组蛋白的表达、纯化和复性 | 第39-58页 |
| 1. 材料 | 第39-42页 |
| ·试剂 | 第39-41页 |
| ·仪器 | 第41-42页 |
| 2. 方法 | 第42-48页 |
| ·细菌培养 | 第42页 |
| ·TRIZOL一步法提取细胞总RNA | 第42页 |
| ·逆转录PCR(RT-PCR) | 第42-43页 |
| ·载体构建方法 | 第43-45页 |
| ·HMBOX1编码蛋白序列全长的克隆 | 第45页 |
| ·HMBOX1原核表达载体的构建 | 第45-46页 |
| ·重组HMBOX1蛋白的原核表达 | 第46页 |
| ·重组HMBOX1蛋白的纯化和复性 | 第46-48页 |
| 3. 结果 | 第48-55页 |
| ·HMBOX1原核表达载体的构建策略 | 第48-49页 |
| ·HMBOX1基因全长的克隆 | 第49页 |
| ·原核表达载体pET22b-HMBOX1-6His的构建 | 第49-50页 |
| ·重组HMBOX1蛋白的原核诱导表达 | 第50-52页 |
| ·重组HMBOX1蛋白的纯化和复性 | 第52-54页 |
| ·复性HMBOX1重组蛋白的质谱测序 | 第54页 |
| ·重组HMBOX1蛋白的复性鉴定 | 第54-55页 |
| 4. 讨论 | 第55-57页 |
| 5. 结论 | 第57-58页 |
| 第三章 HMBOX1单克隆抗体的制备 | 第58-80页 |
| 1. 材料 | 第58-64页 |
| ·试剂 | 第58-64页 |
| ·仪器 | 第64页 |
| 2. 方法 | 第64-73页 |
| ·酸处理裸菌的制备 | 第64-65页 |
| ·动物免疫方案 | 第65页 |
| ·杂交瘤技术制备单克隆抗体 | 第65-66页 |
| ·单克隆抗体的纯化 | 第66-67页 |
| ·ELISA测定单克隆抗体的滴度 | 第67-68页 |
| ·竞争性ELISA测定单克隆抗体的特异性及亲和力 | 第68-69页 |
| ·质粒DNA和siRNA转染HEK-293T细胞 | 第69-70页 |
| ·SDA-PAGE | 第70-72页 |
| ·Western blot免疫印迹 | 第72页 |
| ·免疫组化 | 第72-73页 |
| 3. 结果 | 第73-77页 |
| ·单克隆抗体的制备 | 第73-75页 |
| ·单克隆抗体的纯化 | 第75-76页 |
| ·单克隆抗体特异性验证 | 第76-77页 |
| ·制备抗体与商业抗体的比较 | 第77页 |
| 4. 讨论 | 第77-79页 |
| 5. 结论 | 第79-80页 |
| 第四章 HMBOX1在细胞内定位及其在人正常组织和肿瘤组织中的表达 | 第80-94页 |
| 1. 材料 | 第80-84页 |
| ·试剂 | 第80-83页 |
| ·仪器 | 第83-84页 |
| 2. 方法 | 第84-86页 |
| ·免疫共沉淀 | 第84-85页 |
| ·细胞爬片的制作 | 第85页 |
| ·流式细胞术胞内检测HMBOX1的表达 | 第85-86页 |
| ·细胞爬片和组织芯片免疫组化 | 第86页 |
| ·SDS-PAGE和Western blot | 第86页 |
| ·统计学分析 | 第86页 |
| 3. 结果 | 第86-91页 |
| ·HMBOX1的细胞内定位 | 第86-87页 |
| ·HMBOX1在人体正常组织中的表达 | 第87-88页 |
| ·HMBOX1在人肿瘤组织中的表达 | 第88-89页 |
| ·HMBOX1在肝细胞系中的表达 | 第89-91页 |
| ·HMBOX1在肝癌组织中的表达 | 第91页 |
| 4. 讨论 | 第91-93页 |
| 5. 结论 | 第93-94页 |
| 总结与展望 | 第94-95页 |
| 1. 论文主要结论 | 第94页 |
| 2. 展望 | 第94-95页 |
| 附录 | 第95-102页 |
| 1. 第一次PCR-克隆的HMBOX1编码序列全长 | 第95-96页 |
| 2. 第二次PCR-克隆的原核表达载体中HMBOX1编码序列全长 | 第96-97页 |
| 3. 重组HMBOX1融合蛋白序列 | 第97-100页 |
| 4. 重组HMBOX1融合蛋白质谱测序图 | 第100-102页 |
| 参考文献 | 第102-108页 |
| 致谢 | 第108-109页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第109-110页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第110-111页 |
| 外文论文 | 第111-150页 |
| 1. Recombinant expression of a novel human transcriptional repressor HMBOX1 and preparation of anti-HMBOX1 monoclonal antibody | 第111-135页 |
| 2. Expression profile of HMBOX1, a novel transcription factor, in human cancers by high specific monoclonal antibodies | 第135-150页 |
