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小鼠胚胎干细胞诱导分化为肾脏样细胞的实验研究

英文缩词表第1-8页
中文摘要第8-11页
英文摘要第11-15页
前言第15-17页
实验技术路线第17-18页
第一部分 饲养层细胞的分离培养第18-30页
 1 材料和方法第18-23页
   ·主要试剂第18-20页
     ·主要仪器第18-19页
     ·主要试剂第19页
     ·主要溶液的配置第19-20页
   ·实验方法与步骤第20-23页
     ·小鼠胚胎成纤维细胞的原代培养第21-22页
     ·小鼠胚胎成纤维细胞的传代培养第22页
     ·小鼠胚胎成纤维细胞的冻存与复苏第22页
     ·小鼠胚胎成纤维细胞生长曲线测定第22页
     ·小鼠胚胎成纤维细胞分裂指数测定第22页
     ·MEFs饲养层的制备第22-23页
 2 结果第23-27页
   ·小鼠胚胎成纤维细胞的生长行为、形态特征第23-24页
   ·细胞生长曲线第24-25页
   ·细胞分裂指数第25-26页
   ·冻存与复苏第26页
   ·裂霉素C作用MEF浓度,时间筛选第26-27页
 3 讨论第27-29页
 4 小结第29-30页
第二部分 小鼠胚胎干细胞的分离、培养及鉴定.第30-44页
 1 材料与方法第30-37页
   ·主要材料与试剂的配置第30-31页
     ·主要试剂第30-31页
     ·ESC细胞培养基溶液配制第31页
     ·冲胚液的配制第31页
     ·LIF的分装第31页
   ·实验方法与步骤第31-33页
     ·超排卵处理小鼠:第31-32页
     ·胚胎的获得与培养第32页
     ·ICM的离散第32-33页
     ·ES细胞集落的分离、传代第33页
   ·ESC的鉴定第33-37页
     ·形态学观察第33页
     ·碱性磷酸酶(AKP)染色第33-34页
     ·RT-PCR检测oct-4.nanog的表达第34-36页
     ·核型分析第36页
     ·ES细胞样集落多分化潜能鉴定第36-37页
 2 结果第37-41页
   ·ES细胞的分离培养过程第37页
   ·小鼠胚胎干细胞的鉴定第37-41页
   (1) 形态学观察第37-38页
   (2) AKP染色第38页
   (3) OCT-4和NANOG的RT-PCR分析第38-39页
   (4) 核型分析第39-40页
   (5) 体外分化能力鉴定第40页
   (6) 体内分化能力鉴定:第40-41页
 3 讨论第41-43页
 4 小结第43-44页
第三部分 定向诱导ES细胞向肾脏样细胞的分化第44-57页
 1 材料和方法第44-51页
   ·主要材料第44页
   ·主要试剂、溶液及配制第44-45页
   ·实验方法第45-51页
     ·大鼠胚胎后肾间充质细胞的分离、培养第46页
     ·大鼠胚胎后肾间充质细胞的传代第46页
     ·大鼠胚胎后肾间充质细胞的鉴定第46-48页
    (1) 细胞HE染色第46-47页
    (2) 细胞免疫化学检测细胞生物特性第47页
    (3) 透射电镜观察第47-48页
     ·定向诱导ESCs细胞向肾脏样细胞的分化第48-51页
    (1) ESCs细胞发育为拟胚体第48页
    (2) 拟胚体细胞与胚胎后肾间质细胞共培养模型的建立第48-49页
    (3) RT-PCR法检测肾脏标志物的表达第49-51页
 2 结果第51-55页
   ·胚胎后肾间充质细胞的培养及鉴定第51-53页
   (1) 形态学特征第51-52页
   (2) 细胞免疫化学分析第52-53页
   (3) 细胞电镜学检查第53页
   ·拟胚体体外诱导的生长观察第53-54页
   ·RT-PCR检测肾脏标志物的表达第54-55页
 3 讨论第55-56页
 4 小结第56-57页
总结及展望第57-58页
参考文献第58-66页
综述第66-76页
致谢第76-77页
学习期间发表论文第77页

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