英文缩词表 | 第1-8页 |
中文摘要 | 第8-11页 |
英文摘要 | 第11-15页 |
前言 | 第15-17页 |
实验技术路线 | 第17-18页 |
第一部分 饲养层细胞的分离培养 | 第18-30页 |
1 材料和方法 | 第18-23页 |
·主要试剂 | 第18-20页 |
·主要仪器 | 第18-19页 |
·主要试剂 | 第19页 |
·主要溶液的配置 | 第19-20页 |
·实验方法与步骤 | 第20-23页 |
·小鼠胚胎成纤维细胞的原代培养 | 第21-22页 |
·小鼠胚胎成纤维细胞的传代培养 | 第22页 |
·小鼠胚胎成纤维细胞的冻存与复苏 | 第22页 |
·小鼠胚胎成纤维细胞生长曲线测定 | 第22页 |
·小鼠胚胎成纤维细胞分裂指数测定 | 第22页 |
·MEFs饲养层的制备 | 第22-23页 |
2 结果 | 第23-27页 |
·小鼠胚胎成纤维细胞的生长行为、形态特征 | 第23-24页 |
·细胞生长曲线 | 第24-25页 |
·细胞分裂指数 | 第25-26页 |
·冻存与复苏 | 第26页 |
·裂霉素C作用MEF浓度,时间筛选 | 第26-27页 |
3 讨论 | 第27-29页 |
4 小结 | 第29-30页 |
第二部分 小鼠胚胎干细胞的分离、培养及鉴定. | 第30-44页 |
1 材料与方法 | 第30-37页 |
·主要材料与试剂的配置 | 第30-31页 |
·主要试剂 | 第30-31页 |
·ESC细胞培养基溶液配制 | 第31页 |
·冲胚液的配制 | 第31页 |
·LIF的分装 | 第31页 |
·实验方法与步骤 | 第31-33页 |
·超排卵处理小鼠: | 第31-32页 |
·胚胎的获得与培养 | 第32页 |
·ICM的离散 | 第32-33页 |
·ES细胞集落的分离、传代 | 第33页 |
·ESC的鉴定 | 第33-37页 |
·形态学观察 | 第33页 |
·碱性磷酸酶(AKP)染色 | 第33-34页 |
·RT-PCR检测oct-4.nanog的表达 | 第34-36页 |
·核型分析 | 第36页 |
·ES细胞样集落多分化潜能鉴定 | 第36-37页 |
2 结果 | 第37-41页 |
·ES细胞的分离培养过程 | 第37页 |
·小鼠胚胎干细胞的鉴定 | 第37-41页 |
(1) 形态学观察 | 第37-38页 |
(2) AKP染色 | 第38页 |
(3) OCT-4和NANOG的RT-PCR分析 | 第38-39页 |
(4) 核型分析 | 第39-40页 |
(5) 体外分化能力鉴定 | 第40页 |
(6) 体内分化能力鉴定: | 第40-41页 |
3 讨论 | 第41-43页 |
4 小结 | 第43-44页 |
第三部分 定向诱导ES细胞向肾脏样细胞的分化 | 第44-57页 |
1 材料和方法 | 第44-51页 |
·主要材料 | 第44页 |
·主要试剂、溶液及配制 | 第44-45页 |
·实验方法 | 第45-51页 |
·大鼠胚胎后肾间充质细胞的分离、培养 | 第46页 |
·大鼠胚胎后肾间充质细胞的传代 | 第46页 |
·大鼠胚胎后肾间充质细胞的鉴定 | 第46-48页 |
(1) 细胞HE染色 | 第46-47页 |
(2) 细胞免疫化学检测细胞生物特性 | 第47页 |
(3) 透射电镜观察 | 第47-48页 |
·定向诱导ESCs细胞向肾脏样细胞的分化 | 第48-51页 |
(1) ESCs细胞发育为拟胚体 | 第48页 |
(2) 拟胚体细胞与胚胎后肾间质细胞共培养模型的建立 | 第48-49页 |
(3) RT-PCR法检测肾脏标志物的表达 | 第49-51页 |
2 结果 | 第51-55页 |
·胚胎后肾间充质细胞的培养及鉴定 | 第51-53页 |
(1) 形态学特征 | 第51-52页 |
(2) 细胞免疫化学分析 | 第52-53页 |
(3) 细胞电镜学检查 | 第53页 |
·拟胚体体外诱导的生长观察 | 第53-54页 |
·RT-PCR检测肾脏标志物的表达 | 第54-55页 |
3 讨论 | 第55-56页 |
4 小结 | 第56-57页 |
总结及展望 | 第57-58页 |
参考文献 | 第58-66页 |
综述 | 第66-76页 |
致谢 | 第76-77页 |
学习期间发表论文 | 第77页 |