| 英文缩略语表 | 第11-12页 |
| 摘要 | 第12-13页 |
| Abstract | 第13-14页 |
| 1 前言 | 第15-33页 |
| 1.1 生物制氢 | 第16-20页 |
| 1.1.1 生物光解产氢 | 第16-17页 |
| 1.1.2 光发酵产氢 | 第17-18页 |
| 1.1.3 暗发酵产氢 | 第18-19页 |
| 1.1.4 两步法产氢 | 第19-20页 |
| 1.2 氢酶 | 第20-30页 |
| 1.2.1 氢酶的分类 | 第20-21页 |
| 1.2.2 氢酶的结构与作用机理 | 第21-30页 |
| 1.3 氢酶的应用 | 第30-31页 |
| 1.4 氢酶的异源表达 | 第31-32页 |
| 1.5 深海热泉环境 | 第32页 |
| 1.6 本研究的目的和意义 | 第32-33页 |
| 2 实验材料与实验仪器 | 第33-38页 |
| 2.1 实验材料 | 第33-38页 |
| 2.1.1 菌种 | 第33页 |
| 2.1.2 质粒 | 第33页 |
| 2.1.3 引物 | 第33-34页 |
| 2.1.4 培养基的配制 | 第34页 |
| 2.1.5 菌体的培养 | 第34-35页 |
| 2.1.6 常用试剂及配方 | 第35-37页 |
| 2.1.7 主要的实验仪器 | 第37-38页 |
| 3 实验方法 | 第38-49页 |
| 3.1 氢酶基因与结构分析 | 第38页 |
| 3.1.1 在线预测分析工具 | 第38页 |
| 3.1.2 分析软件 | 第38页 |
| 3.2 C.azorensis H53214氢酶基因扩增 | 第38-40页 |
| 3.2.1 C.azorensis H53214基因组DNA的提取 | 第38-39页 |
| 3.2.2 C.azorensis H53214氢酶基因的扩增 | 第39-40页 |
| 3.2.3 核酸电泳及扩增产物回收 | 第40页 |
| 3.3 表达质粒载体的构建 | 第40-43页 |
| 3.3.1 氢酶基因与表达载体双酶切 | 第40-41页 |
| 3.3.2 氢酶基因与质粒大片段酶连 | 第41-43页 |
| 3.4 重组菌株的构建 | 第43-44页 |
| 3.4.1 将重组质粒转化到E.coli DH5α感受态细胞 | 第43-44页 |
| 3.4.2 将重组质粒转化到K.oxytoca HP1感受态细胞 | 第44页 |
| 3.5 氢酶蛋白的诱导表达与检测 | 第44-47页 |
| 3.5.1 氢酶蛋白的诱导表达 | 第44-45页 |
| 3.5.2 SDS-PAGE检测 | 第45-46页 |
| 3.5.3 WesternBlot检测 | 第46-47页 |
| 3.6 重组菌株产氢能力测定 | 第47页 |
| 3.7 重组菌株酶活的测定 | 第47-48页 |
| 3.8 重组蛋白的纯化 | 第48-49页 |
| 4 实验结果 | 第49-78页 |
| 4.1 氢酶结构基因及氢酶成熟基因结构分析 | 第49-59页 |
| 4.1.1 [FeFe]-氢酶结构基因分析 | 第51-56页 |
| 4.1.2 [FeFe]-氢酶成熟基因序列分析 | 第56-59页 |
| 4.2 氢酶基因的扩增 | 第59-60页 |
| 4.3 原核表达载体的构建 | 第60-67页 |
| 4.3.1 pGEX-4T-1/HydA1表达载体的构建 | 第60-62页 |
| 4.3.2 pGEX-4T-1/HydA2表达载体的构建 | 第62-63页 |
| 4.3.3 pGEX-4T-1/HydE表达载体的构建 | 第63-64页 |
| 4.3.4 pGEX-4T-1/HydF表达载体的构建 | 第64-65页 |
| 4.3.5 pGEX-4T-1/HydG表达载体的构建 | 第65-66页 |
| 4.3.6 HP1重组菌株的构建 | 第66-67页 |
| 4.4 重组菌株蛋白诱导表达 | 第67-68页 |
| 4.5 重组菌株产氢能力测定 | 第68-70页 |
| 4.6 重组菌株酶活分析 | 第70-71页 |
| 4.6.1 诱导时间对重组菌株酶活的影响 | 第70页 |
| 4.6.2 不同温度对酶活的影响 | 第70-71页 |
| 4.7 重组蛋白的纯化 | 第71-78页 |
| 4.7.1 GST/HydA1蛋白的纯化 | 第71-72页 |
| 4.7.2 GST/HydA2蛋白的纯化 | 第72-73页 |
| 4.7.3 GST/HydE蛋白的纯化 | 第73-74页 |
| 4.7.4 GST/HydF蛋白的纯化 | 第74-75页 |
| 4.7.5 GST/HydG蛋白的纯化 | 第75-78页 |
| 5 实验讨论 | 第78-82页 |
| 5.1 C.azorensis H53214氢酶基因的比较分析 | 第78-79页 |
| 5.2 C.azorensis H53214氢酶基因的克隆和蛋白表达 | 第79页 |
| 5.3 C.azorensis H53214氢酶蛋白的表达对产氢的影响 | 第79-80页 |
| 5.4 HP1-HydA2菌株产氢酶活的优化 | 第80页 |
| 5.5 C.azorensis H53214氢酶蛋白的纯化 | 第80-82页 |
| 6 实验结论与展望 | 第82-84页 |
| 6.1 结论 | 第82页 |
| 6.2 展望 | 第82-84页 |
| 附录 | 第84-90页 |
| 参考文献 | 第90-99页 |
| 致谢 | 第99页 |
