| 摘要 | 第6-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 缩略词表及其英汉对照 | 第9-10页 |
| 第一章 引言 | 第10-20页 |
| 1.1 黄瓜遗传转化研究进展 | 第10-13页 |
| 1.1.1 黄瓜再生体系研究进展 | 第10-11页 |
| 1.1.2 黄瓜遗传转化研究现状 | 第11-13页 |
| 1.2 几种常用的遗传修饰方法 | 第13-14页 |
| 1.2.1 基因敲除(gene knockout) | 第13页 |
| 1.2.2 基因过表达(gene overexpression) | 第13页 |
| 1.2.3 RNA干扰(RNA interference,RNAi) | 第13-14页 |
| 1.2.4 反义RNA(antisense RNA) | 第14页 |
| 1.2.5 其它 | 第14页 |
| 1.3 黄瓜CRISPR /Cas9研究现状 | 第14-15页 |
| 1.4 VFB1基因研究概况 | 第15-17页 |
| 1.5 研究目的与意义 | 第17-20页 |
| 第二章 表达载体的改造及构建 | 第20-32页 |
| 2.1 材料 | 第21页 |
| 2.2 方法 | 第21-27页 |
| 2.2.1 pKSE402载体形成 | 第21-23页 |
| 2.2.2 pKSE402-VFB1载体的构建 | 第23-27页 |
| 2.3 结果与分析 | 第27-32页 |
| 2.3.1 pKSE402载体形成 | 第27页 |
| 2.3.2 pKSE402-VFB1基因敲除载体的构建 | 第27-29页 |
| 2.3.3 讨论 | 第29-32页 |
| 第三章 瞬时转化体系的建立 | 第32-40页 |
| 3.1 材料 | 第32页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第32页 |
| 3.1.2 培养基及其它生化试剂 | 第32页 |
| 3.2 方法 | 第32-35页 |
| 3.2.1 下胚轴瞬时转化体系的建立 | 第32-33页 |
| 3.2.2 瞬时转化效率的检测 | 第33-35页 |
| 3.3 结果与分析 | 第35-40页 |
| 3.3.1 外植体生长状态对侵染效率的影响 | 第35-36页 |
| 3.3.2 预培养时间对侵染效率的影响 | 第36-37页 |
| 3.3.3 瞬时检测取样 | 第37页 |
| 3.3.4 瞬时转化片段扩增 | 第37-38页 |
| 3.3.5 讨论 | 第38-40页 |
| 第四章 VFB1基因的遗传转化 | 第40-48页 |
| 4.1 材料 | 第40页 |
| 4.2 方法 | 第40-42页 |
| 4.2.1 播种培养基的制备 | 第40页 |
| 4.2.2 外植体的消毒 | 第40页 |
| 4.2.3 外植体的播种 | 第40页 |
| 4.2.4 农杆菌菌液的制备 | 第40页 |
| 4.2.5 外植体的侵染 | 第40页 |
| 4.2.6 再生植株的抗性筛选 | 第40-41页 |
| 4.2.7 荧光芽的筛选 | 第41页 |
| 4.2.8 荧光苗的生根 | 第41页 |
| 4.2.9 转基因苗的种植 | 第41页 |
| 4.2.10 突变效率检测 | 第41-42页 |
| 4.2.11 遗传转化流程 | 第42页 |
| 4.3 结果与分析 | 第42-48页 |
| 4.3.1 卡那霉素(Kan)对外植体分化的影响 | 第42-43页 |
| 4.3.2 抑菌剂特美汀(TMT)与美罗培南(MPM)对转化效率的影响 | 第43页 |
| 4.3.3 突变效率检测 | 第43-44页 |
| 4.3.4 单克隆测序结果 | 第44-45页 |
| 4.3.5 GFP筛选流程 | 第45页 |
| 4.3.6 讨论 | 第45-48页 |
| 全文结论 | 第48-50页 |
| 参考文献 | 第50-54页 |
| 附录 | 第54-56页 |
| 致谢 | 第56页 |
