| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 缩略语表 | 第14-15页 |
| 第一章 前言 | 第15-22页 |
| 1.1 慢性肾脏病(CHRONIC KIDNEY DISEASE, CKD) | 第15页 |
| 1.2 肾脏纤维化 | 第15-17页 |
| 1.2.1 EMT的定义 | 第15-16页 |
| 1.2.2 肾小管上皮EMT | 第16-17页 |
| 1.3 KLOTHO的相关研究进展 | 第17-18页 |
| 1.3.1 概述 | 第17页 |
| 1.3.2 Klotho的作用机制 | 第17页 |
| 1.3.3 Klotho与肾脏纤维化关系的研究 | 第17-18页 |
| 1.4 维生素D在慢性肾脏病作用及机制的研究 | 第18-20页 |
| 1.4.1 活性维生素D在CKD中的应用 | 第18-19页 |
| 1.4.2 Calcitriol对TGF-β信号通路的影响 | 第19页 |
| 1.4.3 Calcitriol与Klotho的关系 | 第19-20页 |
| 1.5 本论文的研究内容和研究意义 | 第20-22页 |
| 1.5.1 研究内容 | 第20-21页 |
| 1.5.2 研究意义 | 第21-22页 |
| 第二章 实验试剂与仪器 | 第22-27页 |
| 2.1 试验动物及饲养环境 | 第22页 |
| 2.1.1 饲料 | 第22页 |
| 2.2 细胞系 | 第22页 |
| 2.3 主要材料与试剂 | 第22-25页 |
| 2.3.1 主要试剂 | 第22-23页 |
| 2.3.2 抗体 | 第23-24页 |
| 2.3.3 试剂盒 | 第24-25页 |
| 2.3.4 引物合成 | 第25页 |
| 2.4 主要仪器 | 第25-27页 |
| 第三章 实验方法 | 第27-40页 |
| 3.1 动物模型的建立 | 第27-28页 |
| 3.1.1 5/6肾切除步骤 | 第27页 |
| 3.1.2 实验动物的分组 | 第27页 |
| 3.1.3 给药方法 | 第27-28页 |
| 3.2 WESTERN BLOT | 第28-31页 |
| 3.2.1 实验试剂配制 | 第28-29页 |
| 3.2.2 实验步骤 | 第29-31页 |
| 3.3 肾小管上皮细胞的原代培养 | 第31-33页 |
| 3.3.1 相关试剂及配制 | 第31页 |
| 3.3.2 细胞的传代培养、冻存与复苏: | 第31-32页 |
| 3.3.3 细胞Klotho基因敲除 | 第32页 |
| 3.3.4 药物的配制 | 第32-33页 |
| 3.3.5 细胞加药与分组 | 第33页 |
| 3.4 实时荧光定量PCR (REAL-TIME PCR) | 第33-35页 |
| 3.4.1 提取细胞或者组织样品总RNA | 第33-34页 |
| 3.4.2 合成cDNA | 第34-35页 |
| 3.4.3 qRT-PCR扩增反应 | 第35页 |
| 3.5 H.E染色和免疫组织化学 | 第35-38页 |
| 3.5.1 H.E染色 | 第35-36页 |
| 3.5.2 免疫组织化学 | 第36-37页 |
| 3.5.3 Masson染色: | 第37页 |
| 3.5.4 病理积分的标准 | 第37-38页 |
| 3.6 酶联免疫吸附试验(ELISA) | 第38-39页 |
| 3.7 统计学分析 | 第39-40页 |
| 第四章 实验结果 | 第40-55页 |
| 4.1 各组试验大鼠的一般情况 | 第40-41页 |
| 4.1.1 存活情况 | 第40页 |
| 4.1.2 一般情况及体重 | 第40-41页 |
| 4.2 大鼠肾脏病理学改变 | 第41-43页 |
| 4.3 各组大鼠血清IPTH及肾功能指标及的变化 | 第43-44页 |
| 4.4 CALCITRIOL对血清TGF-B1及s-KLOTHO的影响 | 第44-46页 |
| 4.4.1 血清维生素D及Klotho | 第44-46页 |
| 4.5 EMT相关蛋白及TGF-B1、KLOTHO在肾脏组织中的表达 | 第46-51页 |
| 4.5.1 肾脏EMT相关蛋白的表达 | 第46-48页 |
| 4.5.2 肾脏组织中Klotho蛋白及TGF-β1在肾组织中的表达情况 | 第48-51页 |
| 4.6 体外探究CALCITRIOL干预对肾小管上皮细胞KLOTHO表达的影响 | 第51-55页 |
| 4.6.1 Calcitrol干预对TGF-β1刺激细胞纤维化的影响 | 第51-53页 |
| 4.6.2 Calcitrol干预对Klotho基因敲除的影响 | 第53-55页 |
| 第五章 讨论 | 第55-59页 |
| 5.1 督衰模型的建立 | 第55页 |
| 5.2 CALCITRIOL对试验动物血清学及组织学相关因子的影响 | 第55-57页 |
| 5.2.1 Calcitriol对血清中TGF-β1及s-Klotho的的影响 | 第55-56页 |
| 5.2.2 血清中s-Klotho及TGF-β1因子相关关系探讨 | 第56页 |
| 5.2.3 Calcitriol对肾脏组织中EMT相关蛋白及Klotho的表达的影响 | 第56-57页 |
| 5.3 CALCITRIOL对NRK-52E细胞KLOTHO蛋白的保护作用 | 第57-59页 |
| 5.3.1 Calcitriol对TGF-β1诱导NRK-52E细胞纤维化的缓解作用 | 第57-58页 |
| 5.3.2 细胞Klotho基因敲除后对Calcitriol的反应 | 第58-59页 |
| 第六章 结论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
