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骨化三醇通过上调Klotho水平缓解5/6肾切除大鼠肾脏纤维化

摘要第4-6页
ABSTRACT第6-8页
缩略语表第14-15页
第一章 前言第15-22页
    1.1 慢性肾脏病(CHRONIC KIDNEY DISEASE, CKD)第15页
    1.2 肾脏纤维化第15-17页
        1.2.1 EMT的定义第15-16页
        1.2.2 肾小管上皮EMT第16-17页
    1.3 KLOTHO的相关研究进展第17-18页
        1.3.1 概述第17页
        1.3.2 Klotho的作用机制第17页
        1.3.3 Klotho与肾脏纤维化关系的研究第17-18页
    1.4 维生素D在慢性肾脏病作用及机制的研究第18-20页
        1.4.1 活性维生素D在CKD中的应用第18-19页
        1.4.2 Calcitriol对TGF-β信号通路的影响第19页
        1.4.3 Calcitriol与Klotho的关系第19-20页
    1.5 本论文的研究内容和研究意义第20-22页
        1.5.1 研究内容第20-21页
        1.5.2 研究意义第21-22页
第二章 实验试剂与仪器第22-27页
    2.1 试验动物及饲养环境第22页
        2.1.1 饲料第22页
    2.2 细胞系第22页
    2.3 主要材料与试剂第22-25页
        2.3.1 主要试剂第22-23页
        2.3.2 抗体第23-24页
        2.3.3 试剂盒第24-25页
        2.3.4 引物合成第25页
    2.4 主要仪器第25-27页
第三章 实验方法第27-40页
    3.1 动物模型的建立第27-28页
        3.1.1 5/6肾切除步骤第27页
        3.1.2 实验动物的分组第27页
        3.1.3 给药方法第27-28页
    3.2 WESTERN BLOT第28-31页
        3.2.1 实验试剂配制第28-29页
        3.2.2 实验步骤第29-31页
    3.3 肾小管上皮细胞的原代培养第31-33页
        3.3.1 相关试剂及配制第31页
        3.3.2 细胞的传代培养、冻存与复苏:第31-32页
        3.3.3 细胞Klotho基因敲除第32页
        3.3.4 药物的配制第32-33页
        3.3.5 细胞加药与分组第33页
    3.4 实时荧光定量PCR (REAL-TIME PCR)第33-35页
        3.4.1 提取细胞或者组织样品总RNA第33-34页
        3.4.2 合成cDNA第34-35页
        3.4.3 qRT-PCR扩增反应第35页
    3.5 H.E染色和免疫组织化学第35-38页
        3.5.1 H.E染色第35-36页
        3.5.2 免疫组织化学第36-37页
        3.5.3 Masson染色:第37页
        3.5.4 病理积分的标准第37-38页
    3.6 酶联免疫吸附试验(ELISA)第38-39页
    3.7 统计学分析第39-40页
第四章 实验结果第40-55页
    4.1 各组试验大鼠的一般情况第40-41页
        4.1.1 存活情况第40页
        4.1.2 一般情况及体重第40-41页
    4.2 大鼠肾脏病理学改变第41-43页
    4.3 各组大鼠血清IPTH及肾功能指标及的变化第43-44页
    4.4 CALCITRIOL对血清TGF-B1及s-KLOTHO的影响第44-46页
        4.4.1 血清维生素D及Klotho第44-46页
    4.5 EMT相关蛋白及TGF-B1、KLOTHO在肾脏组织中的表达第46-51页
        4.5.1 肾脏EMT相关蛋白的表达第46-48页
        4.5.2 肾脏组织中Klotho蛋白及TGF-β1在肾组织中的表达情况第48-51页
    4.6 体外探究CALCITRIOL干预对肾小管上皮细胞KLOTHO表达的影响第51-55页
        4.6.1 Calcitrol干预对TGF-β1刺激细胞纤维化的影响第51-53页
        4.6.2 Calcitrol干预对Klotho基因敲除的影响第53-55页
第五章 讨论第55-59页
    5.1 督衰模型的建立第55页
    5.2 CALCITRIOL对试验动物血清学及组织学相关因子的影响第55-57页
        5.2.1 Calcitriol对血清中TGF-β1及s-Klotho的的影响第55-56页
        5.2.2 血清中s-Klotho及TGF-β1因子相关关系探讨第56页
        5.2.3 Calcitriol对肾脏组织中EMT相关蛋白及Klotho的表达的影响第56-57页
    5.3 CALCITRIOL对NRK-52E细胞KLOTHO蛋白的保护作用第57-59页
        5.3.1 Calcitriol对TGF-β1诱导NRK-52E细胞纤维化的缓解作用第57-58页
        5.3.2 细胞Klotho基因敲除后对Calcitriol的反应第58-59页
第六章 结论第59-60页
参考文献第60-65页
致谢第65页

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