| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 引言 | 第14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-20页 |
| 1 我国对虾养殖业的发展 | 第14-15页 |
| 2 白斑综合征病毒的研究进展 | 第15-18页 |
| 2.1 白斑综合征病毒的基因组学 | 第15-16页 |
| 2.2 白斑综合征病毒的分子流行病学 | 第16-17页 |
| 2.3 白斑综合征病毒的致病性 | 第17-18页 |
| 3 酵母双杂交技术研究进展 | 第18-19页 |
| 3.1 酵母双杂交技术的原理 | 第18页 |
| 3.2 酵母双杂交技术的应用 | 第18-19页 |
| 4 研究目的与意义 | 第19-20页 |
| 第二章 2016-2017年中国部分地区白斑综合征病毒wsv-pol、wsv006基因的变异分析 | 第20-39页 |
| 1 材料与方法 | 第20-29页 |
| 1.1 实验材料 | 第20-27页 |
| 1.2 主要实验试剂 | 第27页 |
| 1.3 病毒核酸提取 | 第27页 |
| 1.4 样本的套式PCR检测 | 第27页 |
| 1.5 目的基因的PCR扩增 | 第27-28页 |
| 1.6 目的基因的克隆及序列分析 | 第28-29页 |
| 2 结果与分析 | 第29-37页 |
| 2.1 套式PCR检测结果 | 第29页 |
| 2.2 目的基因的PCR扩增结果 | 第29-31页 |
| 2.3 序列比对 | 第31-37页 |
| 3 讨论 | 第37-39页 |
| 第三章 wsv-pol、wsv006与宿主互作基因的筛选 | 第39-81页 |
| 1 凡纳滨对虾肠组织酵母双杂交系统文库的质量鉴定 | 第39-43页 |
| 1.1 材料与方法 | 第39-40页 |
| 1.1.1 实验材料 | 第39页 |
| 1.1.2 主要实验试剂 | 第39-40页 |
| 1.1.3 实验方法 | 第40页 |
| 1.1.3.1 文库容量测定 | 第40页 |
| 1.1.3.2 插入片段长度的鉴定 | 第40页 |
| 1.2 实验结果 | 第40-42页 |
| 1.2.1 文库容量测定 | 第40-41页 |
| 1.2.2 插入片段长度的鉴定 | 第41-42页 |
| 1.3 讨论 | 第42-43页 |
| 2 酵母诱饵载体pGBKT7-pol、pGBKT7-006的构建 | 第43-50页 |
| 2.1 材料与方法 | 第43-46页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第43页 |
| 2.1.2 主要实验试剂 | 第43页 |
| 2.1.3 引物 | 第43-44页 |
| 2.1.4 PCR扩增与产物的纯化 | 第44页 |
| 2.1.5 pGBKT7质粒的酶切和纯化 | 第44-45页 |
| 2.1.6 诱饵载体pGBKT7-pol、pGBKT7-006的连接与鉴定 | 第45-46页 |
| 2.2 实验结果 | 第46-48页 |
| 2.2.1 pGBKT7酶切和纯化 | 第46页 |
| 2.2.2 获得wsv-pol、wsv-006纯化产物 | 第46-47页 |
| 2.2.3 诱饵载体pGBKT7-pol、pGBKT7-006、的连接与鉴定 | 第47-48页 |
| 2.3 讨论 | 第48-50页 |
| 3 诱饵载体的转化与活性检测 | 第50-59页 |
| 3.1 材料与方法 | 第50-53页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第50页 |
| 3.1.2 主要实验试剂 | 第50页 |
| 3.1.3 酵母感受态细胞的制备 | 第50-51页 |
| 3.1.4 载体转化感受态细胞 | 第51-52页 |
| 3.1.5 诱饵载体pGBKT7-pol、pGBKT7-006毒性检测 | 第52页 |
| 3.1.6 诱饵载体pGBKT7-pol、pGBKT7-006自激性检测 | 第52页 |
| 3.1.7 计算转化效率 | 第52-53页 |
| 3.1.8 诱饵菌株的鉴定 | 第53页 |
| 3.2 实验结果 | 第53-57页 |
| 3.2.1 诱饵载体转化酵母感受态细胞 | 第53-54页 |
| 3.2.2 诱饵载体pGBKT7-pol、pGBKT7-006毒性检测 | 第54-55页 |
| 3.2.3 诱饵载体pGBKT7-pol、pGBKT7-006自激性检测 | 第55-56页 |
| 3.2.4 计算转化效率 | 第56-57页 |
| 3.3 讨论 | 第57-59页 |
| 4 诱饵菌株Y187[pGBKT7-pol]、Y187[pGBKT7-006]与文库菌株接合培养 | 第59-67页 |
| 4.1 材料与方法 | 第59-62页 |
| 4.1.1 主要实验试剂 | 第59页 |
| 4.1.2 对照实验 | 第59-60页 |
| 4.1.3 诱饵菌株的增殖培养 | 第60-61页 |
| 4.1.4 文库菌株和诱饵菌株接合培养 | 第61页 |
| 4.1.5 计算接合效率 | 第61-62页 |
| 4.1.5.1 “限制方”菌株的判定 | 第61-62页 |
| 4.1.5.2 计算接合效率 | 第62页 |
| 4.2 实验结果 | 第62-66页 |
| 4.2.1 对照实验结果 | 第62-63页 |
| 4.2.2 接合反应的鉴定 | 第63-64页 |
| 4.2.3 接合效率 | 第64-66页 |
| 4.2.3.1 “限制方”菌株的判定 | 第64-65页 |
| 4.2.3.2 计算接合效率 | 第65-66页 |
| 4.3 讨论 | 第66-67页 |
| 5 酵母双杂交阳性克隆的筛选与鉴定 | 第67-81页 |
| 5.1 材料与方法 | 第67-68页 |
| 5.1.1 主要实验试剂 | 第67页 |
| 5.1.2 初筛 | 第67页 |
| 5.1.3 复筛 | 第67页 |
| 5.1.4 插入片段的生物信息学分析 | 第67-68页 |
| 5.1.5 回复杂交实验 | 第68页 |
| 5.1.5.1 pGADT7-(互作基因)重组载体转化AH109 | 第68页 |
| 5.1.5.2 AH109[pGADT7-(互作基因)]与诱饵菌株接合培养和互作验证. | 第68页 |
| 5.2 实验结果 | 第68-78页 |
| 5.2.1 初筛结果 | 第68-69页 |
| 5.2.2 复筛结果 | 第69-70页 |
| 5.2.3 插入片段的测序 | 第70-77页 |
| 5.2.4 回复杂交实验 | 第77-78页 |
| 5.3 讨论 | 第78-81页 |
| 小结 | 第81-82页 |
| 参考文献 | 第82-89页 |
| 附录 | 第89-90页 |
| 致谢 | 第90页 |
