首页--生物科学论文--分子生物学论文--基因工程(遗传工程)论文

中介蝮蛇毒中Intobin1和Intobin2基因Kex2位点突变体在毕赤酵母中的表达及生物活性研究

摘要第3-6页
AbsTract第6-8页
第1章 绪论第13-29页
    1.1 蛇毒丝氨酸蛋白酶概述第13-14页
    1.2 蛇毒类凝血酶概述第14-20页
        1.2.1 SVTLEs的结构第15-16页
        1.2.2 SVTLEs的理化性质第16-17页
        1.2.3 SVTLEs的药理学作用第17-18页
        1.2.4 SVTLEs的作用机制第18-19页
        1.2.5 SVTLEs的应用第19-20页
    1.3 巴斯德毕赤酵母表达系统第20-25页
        1.3.1 毕赤酵母表达系统的基本体系第20-23页
        1.3.2 影响外源蛋白表达的因素第23-25页
    1.4 基因工程技术重组表达SVTLEs第25-27页
        1.4.1 SVTLEs的原核表达第26页
        1.4.2 SVTLEs的真核表达第26-27页
    1.5 本文的选题依据及研究内容第27-29页
第2章 基因序列的生物信息学分析及密码子优化第29-37页
    2.1 实验材料第29页
    2.2 实验方法第29-30页
        2.2.1 生物信息学分析第29页
        2.2.2 毕赤酵母密码子偏爱性分析第29页
        2.2.3 密码子优化第29-30页
    2.3 实验结果第30-37页
        2.3.1 基因及氨基酸序列分析第30页
        2.3.2 氨基酸序列同源性分析第30-31页
        2.3.3 毕赤酵母密码子偏爱性分析结果第31-32页
        2.3.4 密码子优化结果第32-37页
第3章 真核表达载体的构建第37-45页
    3.1 实验材料第37-38页
        3.1.1 实验菌株及载体第37页
        3.1.2 实验仪器第37页
        3.1.3 主要实验试剂第37-38页
    3.2 实验方法第38-42页
        3.2.1 目的基因与引物的合成第38页
        3.2.2 目的基因mIntobin1和mIntobin2的获得第38-39页
        3.2.3 pPIC9K载体的获得第39页
        3.2.4 目的基因与表达载体双酶切第39页
        3.2.5 目的基因与载体连接第39-40页
        3.2.6 TOP10感受态细胞的制备第40页
        3.2.7 重组质粒的转化第40页
        3.2.8 质粒DNA的提取第40-41页
        3.2.9 重组载体的鉴定第41-42页
    3.3 实验结果第42-45页
        3.3.1 目的基因的PCR扩增第42-43页
        3.3.2 pPIC9K载体双酶切第43页
        3.3.3 重组载体的鉴定第43-45页
第4章 重组载体电转化入毕赤酵母及高抗性转化子的筛选及阳性克隆的鉴定第45-57页
    4.1 实验材料第45页
        4.1.1 实验菌种和载体第45页
        4.1.2 实验仪器第45页
        4.1.3 实验主要试剂第45页
    4.2 实验方法第45-50页
        4.2.1 重组载体线性化第45-46页
        4.2.2 毕赤酵母GS115感受态细胞的制备第46页
        4.2.3 重组质粒的电转化第46-47页
        4.2.4 重组菌株的筛选与鉴定第47页
        4.2.5 阳性克隆的鉴定第47-48页
        4.2.6 目的蛋白的初步诱导表达第48-49页
        4.2.7 SDS-PAGE初步检测目的蛋白第49-50页
        4.2.8 目的蛋白的WesteRN-blot鉴定第50页
    4.3 实验结果第50-57页
        4.3.1 重组载体线性化第50-51页
        4.3.2 重组载体电转入GS115第51-52页
        4.3.3 高抗性转化子的筛选第52-53页
        4.3.4 高抗性转化子整型鉴定第53页
        4.3.5 高抗性转化子基因组DNA的鉴定第53-54页
        4.3.6 SDS-PAGE初步鉴定目的蛋白第54-55页
        4.3.7 WesteRN-blot鉴定第55-57页
第5章 重组蛋白发酵条件优化及其纯化第57-67页
    5.1 实验材料第57页
        5.1.1 菌株第57页
        5.1.2 实验仪器第57页
        5.1.3 实验试剂第57页
    5.2 实验方法第57-60页
        5.2.1 Bradford法测定蛋白浓度第57页
        5.2.2 发酵条件的优化第57-59页
        5.2.3 重组蛋白的纯化第59页
        5.2.4 目的蛋白的定量分析第59-60页
    5.3 实验结果第60-67页
        5.3.1 Bradford法测定蛋白浓度第60页
        5.3.2 发酵条件优化第60-64页
        5.3.3 重组蛋白的纯化第64页
        5.3.4 目的蛋白的定量分析第64-67页
第6章 重组蛋白的生物学活性检测第67-71页
    6.1 实验材料第67页
    6.2 实验仪器第67页
    6.3 实验试剂第67页
    6.4 实验方法第67-68页
        6.4.1 酰胺水解活性的测定第67页
        6.4.2 纤溶活性测定第67-68页
        6.4.3 纤维蛋白原水解活性测定第68页
    6.5 结果第68-71页
        6.5.1 酰胺水解活性的测定第68页
        6.5.2 纤溶活性测定第68-69页
        6.5.3 纤维蛋白原水解活性的测定第69-71页
第7章 讨论第71-75页
    7.1 密码子优化第71页
    7.2 mIntobin1/ mIntobin2在毕赤酵母中的分泌表达第71-72页
    7.3 发酵条件优化及纯化情况第72-73页
    7.4 相关活性的探讨第73-75页
第8章 结论第75-77页
参考文献第77-87页
附录第87-93页
致谢第93-95页
攻读硕士期间研究成果第95页

论文共95页,点击 下载论文
上一篇:茵陈蒿提取物杀菌制剂研制
下一篇:钢纤维再生混凝土配合比及基本力学性能