摘要 | 第5-6页 |
Abstract | 第6页 |
第一章 绪论 | 第11-24页 |
1.1 过氧化物酶体增殖激活性受体delta(PPARδ) | 第11-13页 |
1.1.1 PPARδ概述 | 第11-12页 |
1.1.2 PPARδ和肿瘤 | 第12-13页 |
1.2 肿瘤细胞糖代谢 | 第13-15页 |
1.3 自噬和肿瘤 | 第15-17页 |
1.4 线粒体自噬 | 第17-21页 |
1.4.1 线粒体的分裂(fission)与融合(fusion) | 第17-18页 |
1.4.2 线粒体自噬机制 | 第18-20页 |
1.4.3 线粒体自噬与肿瘤 | 第20-21页 |
1.5 本研究的意义 | 第21-22页 |
1.6 主要研究内容和技术路线 | 第22-24页 |
1.6.1 主要研究内容 | 第22-23页 |
1.6.2 技术路线 | 第23-24页 |
第二章 PPARδ与LC3B相互作用 | 第24-44页 |
2.1 实验材料 | 第24-29页 |
2.1.1 实验所用质粒和细胞系 | 第24页 |
2.1.2 实验仪器与设备 | 第24-25页 |
2.1.3 实验试剂 | 第25-29页 |
2.2 实验方法 | 第29-42页 |
2.2.1 感受态的制备 | 第29-30页 |
2.2.2 质粒扩增与提取 | 第30-31页 |
2.2.3 Flag-PPARδ质粒点突变 | 第31-33页 |
2.2.4 细胞培养 | 第33-35页 |
2.2.5 质粒转染细胞 | 第35-36页 |
2.2.6 细胞总蛋白制备 | 第36页 |
2.2.7 细胞蛋白浓度测定与定量 | 第36-37页 |
2.2.8 Westernblot(蛋白免疫印迹)检测目的蛋白水平变化 | 第37-38页 |
2.2.9 蛋白免疫共沉淀(Co-IP)研究PPARδ与LC3B是否存在相互作用 | 第38-39页 |
2.2.10 GST-pulldown分析体外PPARδ与LC3B是否存在相互作用 | 第39-41页 |
2.2.11 双荧光素酶报告基因法检测PPARδ和PPARδ/Y42R的转录活性 | 第41-42页 |
2.3 实验结果与分析 | 第42-43页 |
2.3.1 PPARδ与LC3B存在相互作用 | 第42-43页 |
2.4 本章总结 | 第43-44页 |
第三章 PPARδ促进肿瘤细胞葡萄糖的摄取 | 第44-51页 |
3.1 实验材料 | 第44-45页 |
3.1.1 实验所用质粒和细胞系 | 第44页 |
3.1.2 实验仪器与设备 | 第44-45页 |
3.1.3 实验试剂 | 第45页 |
3.2 实验方法 | 第45-48页 |
3.2.1 质粒扩增与提取 | 第45页 |
3.2.2 细胞培养 | 第45页 |
3.2.3 质粒转染细胞 | 第45-46页 |
3.2.4 细胞总蛋白制备 | 第46页 |
3.2.5 细胞蛋白浓度测定与定量 | 第46页 |
3.2.6 Westernblot(蛋白免疫印迹)检测Glut1蛋白水平变化 | 第46页 |
3.2.7 葡萄糖氧化酶法(GOD)检测PPARδ对肿瘤细胞葡萄糖消耗的影响 | 第46-47页 |
3.2.8 人L-乳酸酶联免疫分析PPARδ对肿瘤细胞乳酸释放的影响 | 第47页 |
3.2.9 荧光检测PPARδ对肿瘤细胞葡萄糖摄取的影响 | 第47-48页 |
3.3 实验结果与分析 | 第48-49页 |
3.3.1 PPARδ促进肿瘤细胞对葡萄糖摄取 | 第48-49页 |
3.4 本章总结 | 第49-51页 |
第四章 PPARδ抑制线粒体自噬相关蛋白表达 | 第51-62页 |
4.1 实验材料 | 第51-54页 |
4.1.1 实验所用质粒和细胞系 | 第51页 |
4.1.2 实验仪器与设备 | 第51-52页 |
4.1.3 实验试剂 | 第52-54页 |
4.2 实验方法 | 第54-57页 |
4.2.1 质粒扩增与提取 | 第54页 |
4.2.2 细胞培养 | 第54页 |
4.2.3 质粒转染细胞 | 第54页 |
4.2.4 细胞总蛋白制备 | 第54页 |
4.2.5 细胞蛋白浓度测定与定量 | 第54页 |
4.2.6 Westernblot(蛋白免疫印迹)检测目的蛋白水平变化 | 第54-55页 |
4.2.7 细胞免疫荧光检测PPARδ对线粒体自噬的影响 | 第55-56页 |
4.2.8 探针标记检测PPARδ对溶酶体与线粒体共定位的影响 | 第56-57页 |
4.3 实验结果与分析 | 第57-60页 |
4.3.1 PPARδ抑制线粒体自噬 | 第57-59页 |
4.3.2 PPARδ抑制线粒体自噬相关蛋白PINK1、Park2的表达 | 第59-60页 |
4.4 本章总结 | 第60-62页 |
第五章 PPARδ促进肿瘤生长 | 第62-69页 |
5.1 实验材料 | 第62-63页 |
5.1.1 实验质粒和细胞系 | 第62页 |
5.1.2 实验仪器设备与耗材 | 第62页 |
5.1.3 实验试剂 | 第62-63页 |
5.2 实验方法 | 第63-66页 |
5.2.1 构建稳定表达的细胞系 | 第63-64页 |
5.2.2 细胞计数 | 第64页 |
5.2.3 软琼脂克隆形成实验(SoftAgarColonyFormationAssay) | 第64页 |
5.2.4 构建裸鼠异种移植瘤模型 | 第64-66页 |
5.2.5 提取肿瘤组织总蛋白 | 第66页 |
5.2.6 肿瘤组织总蛋白的定量 | 第66页 |
5.2.7 蛋白免疫印迹检测肿瘤组织目的蛋白的表达水平 | 第66页 |
5.3 实验结果与分析 | 第66-68页 |
5.3.1 PPARδ促进肿瘤细胞增殖和肿瘤生长 | 第66-68页 |
5.4 本章总结 | 第68-69页 |
第六章 总结 | 第69-71页 |
参考文献 | 第71-78页 |
致谢 | 第78-79页 |
在读期间的学术成果 | 第79页 |
参与课题 | 第79页 |