| 摘要 | 第6-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-21页 |
| 1.鱼类的非特异性免疫 | 第13-15页 |
| 1.1 免疫器官与组织 | 第13-14页 |
| 1.2 免疫细胞 | 第14页 |
| 1.3 鱼类免疫因子 | 第14-15页 |
| 2.白细胞介素研究进展 | 第15-18页 |
| 2.1 白细胞介素1的发现及分类 | 第15-16页 |
| 2.2 白细胞介素1的结构与功能 | 第16-18页 |
| 3.鱼类白细胞介素1研究进展 | 第18-19页 |
| 4.黄颡鱼免疫的研究概况 | 第19页 |
| 5.本研究的目的及意义 | 第19-21页 |
| 第二章 黄颡鱼Pf_IL-1β基因的克隆和表达分析 | 第21-54页 |
| 1.材料与方法 | 第21-36页 |
| 1.1 实验样本 | 第21-22页 |
| 1.1.1 黄颡鱼成鱼组织样本的采集 | 第21页 |
| 1.1.2 黄颡鱼早期发育时期样本的采集 | 第21页 |
| 1.1.3 鮰爱德华氏菌刺激前后黄颡鱼组织样本的采集 | 第21-22页 |
| 1.2 主要实验仪器与设备 | 第22页 |
| 1.3 药品与试剂 | 第22-24页 |
| 1.3.1 试剂盒及药品 | 第22-23页 |
| 1.3.2 主要试剂配制 | 第23-24页 |
| 1.4 引物设计 | 第24-25页 |
| 1.5 实验方法 | 第25-36页 |
| 1.5.1 总RNA的提取 | 第25-26页 |
| 1.5.2 总RNA质量检测 | 第26页 |
| 1.5.3 cDNA模板制备 | 第26-27页 |
| 1.5.4 黄颡鱼Pf_IL-1β和Pf_IL-1RI基因开放阅读框的克隆 | 第27页 |
| 1.5.5 PCR产物的分离、回收和纯化 | 第27-28页 |
| 1.5.6 目的基因的连接与转化 | 第28-29页 |
| 1.5.7 蓝白斑筛选、菌液PCR及测序 | 第29页 |
| 1.5.8 黄颡鱼Pf_IL-1β基因3'端扩增 | 第29页 |
| 1.5.9 序列的生物信息学分析 | 第29-30页 |
| 1.5.10 荧光定量PCR引物检测和基因表达qPCR | 第30页 |
| 1.5.11 质粒的提取与检测 | 第30-31页 |
| 1.5.12 产物与pGEX-4T-1载体的连接与转化 | 第31-32页 |
| 1.5.13 重组质粒的诱导表达 | 第32-33页 |
| 1.5.14 SDS-PAGE电泳 | 第33-34页 |
| 1.5.15 包涵体的纯化 | 第34页 |
| 1.5.16 蛋白的纯化及多克隆抗体的制备 | 第34-35页 |
| 1.5.17 蛋白质印迹实验 | 第35-36页 |
| 1.5.18 数据分析 | 第36页 |
| 2.结果与分析 | 第36-50页 |
| 2.1 总RNA的检测 | 第36-37页 |
| 2.2 黄颡鱼Pf_IL-1β基因部分序列的克隆与分析 | 第37-42页 |
| 2.2.1 黄颡鱼Pf_IL-1β基因部分序列的特征 | 第37-38页 |
| 2.2.2 黄颡鱼Pf_IL-1β氨基酸序列分析 | 第38-41页 |
| 2.2.3 黄颡鱼Pf_IL-1β基因部分序列的系统进化分析 | 第41-42页 |
| 2.3 黄颡鱼Pf_IL-1β基因mRNA的表达 | 第42-46页 |
| 2.3.1 黄颡鱼Pf_IL-1β基因mRNA在成鱼组织中的表达 | 第42-43页 |
| 2.3.2 黄颡鱼Pf_IL-1β基因mRNA在早期发育阶段的表达 | 第43-45页 |
| 2.3.3 鮰爱德华氏菌刺激后黄颡鱼6种组织中Pf_IL-1β基因mRNA表达量的变化 | 第45-46页 |
| 2.4 黄颡鱼Pf_IL-1β的原核表达、纯化及抗体制备 | 第46-50页 |
| 2.4.1 黄颡鱼IL-1β重组质粒在不同条件下的诱导表达 | 第46-48页 |
| 2.4.2 黄颡鱼重组IL-1β蛋白纯化 | 第48页 |
| 2.4.3 WesternBlot | 第48-50页 |
| 3.讨论 | 第50-54页 |
| 3.1 黄颡鱼Pf_IL-1β基因的序列及结构特征 | 第50-51页 |
| 3.2 黄颡鱼Pf_IL-1β基因的组织特异性表达 | 第51页 |
| 3.3 黄颡鱼Pf_IL-1β基因mRNA在早期发育阶段的表达特征 | 第51-52页 |
| 3.4 鮰爱德华氏菌刺激后黄颡鱼6种组织中Pf_IL-1β基因表达量的变化 | 第52-54页 |
| 第三章 黄颡鱼Pf_IL-1RI基因的克隆和表达分析 | 第54-64页 |
| 1.材料和方法 | 第54页 |
| 1.1 实验样本 | 第54页 |
| 1.2 引物设计 | 第54页 |
| 1.3 实验方法 | 第54页 |
| 2.结果与分析 | 第54-62页 |
| 2.1 黄颡鱼Pf_IL-1RI基因部分序列的克隆与分析 | 第54-59页 |
| 2.1.1 黄颡鱼Pf_IL-1RI基因部分序列的特征 | 第54-56页 |
| 2.1.2 黄颡鱼Pf_IL-1RI氨基酸序列分析 | 第56-58页 |
| 2.1.3 黄颡鱼Pf_IL-1RI基因部分序列的系统进化分析 | 第58-59页 |
| 2.2 黄颡鱼Pf_IL-1RI基因mRNA的表达 | 第59-62页 |
| 2.2.1 黄颡鱼Pf_IL-1RI基因mRNA在成鱼组织中的表达 | 第59页 |
| 2.2.2 黄颡鱼Pf_IL-1RI基因mRNA在早期发育阶段的表达 | 第59-60页 |
| 2.2.3 鮰爱德华氏菌刺激后黄颡鱼6种组织中Pf_IL-1RI基因mRNA表达量的变化 | 第60-62页 |
| 3.讨论 | 第62-64页 |
| 3.1 黄颡鱼Pf_IL-1RI基因的序列及结构特征 | 第62页 |
| 3.2 黄颡鱼Pf_IL-1RI基因mRNA的组织特异性表达 | 第62-63页 |
| 3.3 黄颡鱼Pf_IL-1RI基因mRNA在早期发育阶段的表达特征 | 第63页 |
| 3.4 鮰爱德华氏菌刺激后黄颡鱼6种组织中Pf_IL-1RI基因mRNA表达量的变化 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-73页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第73-74页 |
| 致谢 | 第74页 |
