| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 绪论 | 第10-18页 |
| 1.1 两栖动物生存现状及数量下降原因 | 第10-11页 |
| 1.1.1 两栖动物 | 第10页 |
| 1.1.2 两栖动物的生存现状 | 第10页 |
| 1.1.3 威胁两栖动物的原因 | 第10-11页 |
| 1.2 东北林蛙 | 第11-12页 |
| 1.2.1 东北林蛙的生存现状 | 第11-12页 |
| 1.2.2 东北林蛙的研究价值 | 第12页 |
| 1.2.3 东北林蛙的国内外研究现状 | 第12页 |
| 1.3 嗜水气单胞菌 | 第12-13页 |
| 1.3.1 嗜水气单胞菌简介 | 第12-13页 |
| 1.3.2 嗜水气单胞菌对两栖类的威胁 | 第13页 |
| 1.4 TLR4研究 | 第13-17页 |
| 1.4.1 TLR发现与进展 | 第13-14页 |
| 1.4.2 由TLR4介导的功能 | 第14-15页 |
| 1.4.3 哺乳动物TLR4信号途径 | 第15-17页 |
| 1.4.4 两栖类TLR4信号通路研究进展 | 第17页 |
| 1.5 本研究的目的与意义 | 第17-18页 |
| 2 材料与方法 | 第18-26页 |
| 2.1 材料 | 第18-19页 |
| 2.1.1 试验动物及菌株 | 第18页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第18页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第18页 |
| 2.1.4 试剂的配制 | 第18-19页 |
| 2.2 实验方法 | 第19-25页 |
| 2.2.1 嗜水气单胞菌浓度的测定 | 第19页 |
| 2.2.2 嗜水气单胞菌接种 | 第19页 |
| 2.2.3 东北林蛙组织采集 | 第19-20页 |
| 2.2.4 组织总RNA提取 | 第20页 |
| 2.2.5 引物设计 | 第20页 |
| 2.2.6 RT-PCR扩增 | 第20-21页 |
| 2.2.7 琼脂糖凝胶电泳 | 第21-22页 |
| 2.2.8 回收胶 | 第22页 |
| 2.2.9 连接T载体 | 第22页 |
| 2.2.10 转化 | 第22-23页 |
| 2.2.11 蓝白斑筛选 | 第23页 |
| 2.2.12 质粒DNA的提取 | 第23页 |
| 2.2.13 限制性内切酶反应及测序 | 第23-24页 |
| 2.2.14 荧光定量PCR反应 | 第24页 |
| 2.2.15 数据收集处理和分析 | 第24-25页 |
| 2.3 本章小结 | 第25-26页 |
| 3 结果 | 第26-35页 |
| 3.1 嗜水气单胞菌培养结果 | 第26页 |
| 3.2 总RNA提取结果 | 第26页 |
| 3.3 RT-PCR扩增结果 | 第26-27页 |
| 3.4 内参基因 | 第27页 |
| 3.5 荧光定量PCR退火温度优化结果 | 第27-28页 |
| 3.6 荧光定量PCR熔解曲线 | 第28-30页 |
| 3.6.1 TLR4 mRNA的熔解曲线图 | 第28页 |
| 3.6.2 MyD88 mRNA的熔解曲线图 | 第28页 |
| 3.6.3 IRAK4 mRNA的熔解曲线图 | 第28-29页 |
| 3.6.4 TRAF6 mRNA的熔解曲线图 | 第29页 |
| 3.6.5 NF-κB mRNA的熔解曲线图 | 第29-30页 |
| 3.7 嗜水气单胞菌对东北林蛙TLR4、MyD88、IRAK4、TRAF6和NF-κB mRNA表达量的影响 | 第30-34页 |
| 3.7.1 嗜水气单胞菌对东北林蛙肾脏TLR4、MyD88、IRAK4和TRAF6 mRNA表达量的影响 | 第30-31页 |
| 3.7.2 嗜水气单胞菌对东北林蛙心脏TLR4、MyD88、IRAK4和TRAF6 mRNA表达量的影响 | 第31-32页 |
| 3.7.3 嗜水气单胞菌对东北林蛙肝脏TLR4、MyD88、IRAK4和TRAF6 mRNA表达量的影响 | 第32-33页 |
| 3.7.4 嗜水气单胞菌对心脏、肝脏和肾脏NF-KB mRNA表达量的影响 | 第33-34页 |
| 3.8 本章小结 | 第34-35页 |
| 4 讨论 | 第35-39页 |
| 4.1 液体培养基影响因素的消除 | 第35页 |
| 4.2 东北林蛙的信号通路与天然免疫 | 第35-36页 |
| 4.3 TLR4/LPS与早期免疫应答 | 第36-37页 |
| 4.4 MyD88、IRAK4、TRAF6间的相互作用 | 第37页 |
| 4.5 NF-κB的效应机制 | 第37-38页 |
| 4.6 东北林蛙TLR4信号通路的初步研究结果 | 第38-39页 |
| 结论 | 第39-40页 |
| 参考文献 | 第40-47页 |
| 附录 | 第47-53页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第53-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
