| 中文摘要 | 第3-4页 |
| 英文摘要 | 第4-5页 |
| 缩略词 | 第8-9页 |
| 1 绪论 | 第9-15页 |
| 1.1 引言 | 第9页 |
| 1.2 研究背景 | 第9-13页 |
| 1.2.1 外界压力对病原真菌的影响及其致病机理研究进展 | 第9-10页 |
| 1.2.2 Rab5 蛋白家族相关研究进展 | 第10-12页 |
| 1.2.3 GTP酶活化蛋白GYP3 的相关研究进展 | 第12-13页 |
| 1.3 立题依据及研究目的 | 第13-14页 |
| 1.4 研究内容 | 第14页 |
| 1.5 技术路线 | 第14页 |
| 1.6 本课题的创新之处 | 第14-15页 |
| 2 绿僵菌Gyp3 基因的克隆及功能研究 | 第15-56页 |
| 2.1 实验材料 | 第15-18页 |
| 2.1.1 供试菌株及昆虫 | 第15页 |
| 2.1.2 载体质粒 | 第15页 |
| 2.1.3 主要试剂及试剂盒 | 第15-16页 |
| 2.1.4 主要培养基及实验溶液的配制 | 第16-17页 |
| 2.1.5 主要器材与仪器设备 | 第17-18页 |
| 2.2 主要方法 | 第18-37页 |
| 2.2.1 真菌孢子和附着胞RNA的提取并反转为cDNA | 第18-20页 |
| 2.2.2 Gyp3 cDNA测序 | 第20-23页 |
| 2.2.3 真菌基因组DNA的大量提取 | 第23页 |
| 2.2.4 生物信息学分析 | 第23-24页 |
| 2.2.5 Gyp3 基因敲除、回复载体的构建 | 第24-27页 |
| 2.2.6 制备农杆菌感受态细胞 | 第27-28页 |
| 2.2.7 电转化农杆菌并与绿僵菌的共培养 | 第28页 |
| 2.2.8 转化子的筛选和验证 | 第28-31页 |
| 2.2.9 Gyp3 半定量及定量实验 | 第31-32页 |
| 2.2.10 孢子生长能力、产孢量、萌发率分析 | 第32页 |
| 2.2.11 抗逆能力分析 | 第32-33页 |
| 2.2.12 测定菌株对高渗透、细胞壁抑制剂的耐受能力 | 第33页 |
| 2.2.13 毒力测定及分析实验 | 第33-35页 |
| 2.2.14 菌丝侵染切片观察 | 第35页 |
| 2.2.15 测定蝗虫后翅上孢子萌发率和附着胞形成率 | 第35-36页 |
| 2.2.16 膨压测定 | 第36页 |
| 2.2.17 Ypt5 和Ypt51 及Pr1a、Chi半定量及定量实验 | 第36-37页 |
| 2.2.18 数据统计及显著性分析 | 第37页 |
| 2.3 实验结果与分析 | 第37-54页 |
| 2.3.1 Gyp3 基因生物信息学分析 | 第37-41页 |
| 2.3.2 Gyp3 敲除、回复载体的构建及转化菌株验证 | 第41-43页 |
| 2.3.3 Gyp3 基因的缺失延迟了孢子的萌发 | 第43页 |
| 2.3.4 Gyp3 基因的缺失使得菌株对逆境更加敏感 | 第43-45页 |
| 2.3.5 Gyp3 降低菌株对高渗透压耐受性，对细胞壁抑制剂不敏感 | 第45-46页 |
| 2.3.6 毒力测定 | 第46-47页 |
| 2.3.7 虫菌体观察 | 第47-49页 |
| 2.3.8 虫菌体定量 | 第49-50页 |
| 2.3.9 Gyp3 不参与调控附着胞的形成 | 第50-51页 |
| 2.3.10 Gyp3 降低了菌株膨压 | 第51-52页 |
| 2.3.11 Gyp3 抑制附着胞内体壁水解酶基因的表达 | 第52-53页 |
| 2.3.12 冷冻切片分析 | 第53页 |
| 2.3.13 Rab靶标蛋白表达分析 | 第53-54页 |
| 2.4 讨论 | 第54-56页 |
| 3 主要结论及后续工作展望 | 第56-57页 |
| 3.1 主要实验结论 | 第56页 |
| 3.2 后续补充工作 | 第56-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-65页 |
| 附录 | 第65-66页 |
