| 中文摘要 | 第3-5页 |
| abstract | 第5-6页 |
| 1 引言 | 第9-19页 |
| 1.1 小花棘豆内生真菌研究概况 | 第9-10页 |
| 1.2 苦马豆素 | 第10-17页 |
| 1.2.1 SW的理化性质 | 第10-11页 |
| 1.2.2 SW的医学价值 | 第11页 |
| 1.2.3 酵母氨酸还原酶基因与SW的生物合成 | 第11-17页 |
| 1.3 基因互补实验 | 第17-18页 |
| 1.4 研究目的与意义 | 第18-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-32页 |
| 2.1 实验材料 | 第19-24页 |
| 2.1.1 实验菌株及载体 | 第19-20页 |
| 2.1.2 试剂与药品 | 第20-23页 |
| 2.1.2.1 常用试剂 | 第20-21页 |
| 2.1.2.2 常用溶液的配制 | 第21-23页 |
| 2.1.3 引物 | 第23-24页 |
| 2.1.4 主要仪器设备 | 第24页 |
| 2.2 研究方法 | 第24-32页 |
| 2.2.1 液体培养基中内生真菌菌丝及其发酵液中SW含量测定 | 第24-25页 |
| 2.2.1.1 内生真菌的培养 | 第24页 |
| 2.2.1.2 SW的提取 | 第24-25页 |
| 2.2.1.3 SW含量的测定 | 第25页 |
| 2.2.2 酵母氨酸还原酶基因功能对内生真菌SW合成动态的影响.. | 第25页 |
| 2.2.3 酵母氨酸还原酶基因功能互补株的构建 | 第25-28页 |
| 2.2.3.1 互补载体(pBARGPE-Sac)的验证 | 第25-27页 |
| 2.2.3.2 缺失突变株M1原生质体制备与互补载体的转化 | 第27-28页 |
| 2.2.4 酵母氨酸还原酶基因功能互补株的检测 | 第28-31页 |
| 2.2.4.1 互补株sac的PCR检测 | 第28-29页 |
| 2.2.4.2 互补株总RNA的提取 | 第29-30页 |
| 2.2.4.3 互补株cDNA合成 | 第30页 |
| 2.2.4.4 sac基因RT-PCR检测 | 第30页 |
| 2.2.4.5 hph基因RT-PCR检测 | 第30-31页 |
| 2.2.5 互补株中SW含量的检测 | 第31-32页 |
| 3 结果与分析 | 第32-43页 |
| 3.1 液体培养基中菌丝及其发酵液中SW含量的测定 | 第32-33页 |
| 3.2 酵母氨酸还原酶对内生真菌SW动态合成的影响 | 第33-37页 |
| 3.2.1 内生真菌SW含量测定 | 第33-36页 |
| 3.2.2 内生真菌中SW合成动态变化的统计学分析 | 第36-37页 |
| 3.3 酵母氨酸还原酶基因功能互补株的构建 | 第37-43页 |
| 3.3.1 sac功能互补载体(pBARGPE-Sac)的验证 | 第37-38页 |
| 3.3.2 缺失突变株原生质体的制备与载体pBARGPE-Sac的转化 | 第38-39页 |
| 3.3.3 酵母氨酸还原酶基因功能互补株的检测 | 第39-42页 |
| 3.3.3.1 互补株sac的PCR检测 | 第39-40页 |
| 3.3.3.2 总RNA的提取 | 第40页 |
| 3.3.3.3 互补株sac的RT-PCR检测 | 第40-41页 |
| 3.3.3.4 互补株hph的RT-PCR检测 | 第41-42页 |
| 3.3.4 互补株、OW7.8和M1中SW含量检测 | 第42-43页 |
| 4 讨论与结论 | 第43-46页 |
| 4.1 讨论 | 第43-45页 |
| 4.1.1 液体培养基菌丝体及其发酵液中SW含量 | 第43页 |
| 4.1.2 酵母氨酸对内生真菌SW合成动态影响 | 第43-44页 |
| 4.1.3 酵母氨酸还原酶基因功能互补株的构建与验证 | 第44-45页 |
| 4.2 结论 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-52页 |
| 致谢 | 第52-53页 |
| 作者简介 | 第53-54页 |
| 资助项目 | 第54页 |
