| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 第1章 前言 | 第13-20页 |
| 1.1 引言 | 第13-14页 |
| 1.2 PI3K 信号所介导的主要细胞功能 | 第14-15页 |
| 1.3 PI3K 信号通路与肿瘤 | 第15-16页 |
| 1.4 PI3K 抑制剂的研发 | 第16-17页 |
| 1.5 PI3K 抑制剂耐药机制研究进展 | 第17-18页 |
| 1.6 本课题研究方案 | 第18-20页 |
| 1.6.1. SKBR3/CYH33 耐药株的建立及其生物学特性研究 | 第18页 |
| 1.6.2 耐药机制探索 | 第18-20页 |
| 第2章 SKBR3/CYH33 耐药株的建立及其生物学特性 | 第20-31页 |
| 2.1 主要化合物与试剂 | 第20-21页 |
| 2.2 主要仪器与设备 | 第21页 |
| 2.3 方法 | 第21-23页 |
| 2.3.1 细胞培养 | 第21页 |
| 2.3.2 SKBR3/CYH33 耐药细胞株建立 | 第21页 |
| 2.3.3 SRB 法检测 CYH33 对细胞增殖抑制作用 | 第21-22页 |
| 2.3.4 耐药细胞生物学特性观察 | 第22-23页 |
| 2.4 结果 | 第23-29页 |
| 2.4.1 SKBR3/CYH33 耐药细胞株建立 | 第23页 |
| 2.4.2 耐药细胞对 CYH33 的敏感性显著下降 | 第23-24页 |
| 2.4.3 耐药细胞形态发生改变 | 第24-25页 |
| 2.4.4 亲本和耐药细胞大小及周期分布 | 第25-27页 |
| 2.4.5 亲本和耐药细胞增殖速率无明显差异 | 第27页 |
| 2.4.6 耐药细胞对 PI3K 亚型选择性抑制剂选择性耐受 | 第27-29页 |
| 2.5 小结与讨论 | 第29-31页 |
| 第3章 SKBR3/CYH33 细胞耐药机制研究 | 第31-48页 |
| 3.1 实验材料 | 第31页 |
| 3.1.1 主要化合物与试剂 | 第31页 |
| 3.1.2 主要仪器与设备 | 第31页 |
| 3.2 方法 | 第31-36页 |
| 3.2.1 细胞培养 | 第31页 |
| 3.2.2 高效液相色谱法测细胞内 CYH33 浓度 | 第31-32页 |
| 3.2.3 Agilent mRNA 表达谱芯片实验 | 第32-33页 |
| 3.2.4 RT-qPCR 验证 | 第33-34页 |
| 3.2.5 细胞趋化因子 CCL2/MCP-1 含量测定 | 第34-35页 |
| 3.2.6 RNA 干扰实验 | 第35-36页 |
| 3.2.7 Western Blot 实验 | 第36页 |
| 3.3 结果 | 第36-45页 |
| 3.3.1 亲本和耐药细胞内化合物浓度无明显差异 | 第36-37页 |
| 3.3.2 耐药细胞中众多基因 mRNA 水平变化显著 | 第37-38页 |
| 3.3.3 RT-PCR 验证差异基因 | 第38-39页 |
| 3.3.4 耐药细胞中趋化因子 CCL2/MCP-1 显著增加 | 第39-40页 |
| 3.3.5 CCL2 中和性抗体不能逆转耐药细胞对 CYH33 的敏感性 | 第40页 |
| 3.3.6 下调 CCL2 不能逆转耐药细胞对 CYH33 的敏感性 | 第40-41页 |
| 3.3.7 耐药机制不是由可溶性细胞因子介导 | 第41-42页 |
| 3.3.8 耐药细胞中 mTORC1 活性不只受 PI3K 调控 | 第42-43页 |
| 3.3.9 mTOR 抑制剂显著下调细胞中 S6K1 及 rpS6 磷酸化水平 | 第43页 |
| 3.3.10 mTOR 抑制剂显著提高耐药细胞对 CYH33 的敏感性 | 第43-44页 |
| 3.3.11 耐药细胞中 mTOR 不是通过 MEK1/2-ERK1/2 激活 | 第44-45页 |
| 3.4 小结与讨论 | 第45-48页 |
| 第4章 结论与展望 | 第48-50页 |
| 4.1 结论 | 第48页 |
| 4.2 下一步工作计划 | 第48-50页 |
| 4.2.1 进一步阐明耐药细胞中不依赖于 PI3K 的 mTOR 激活机制 | 第48-49页 |
| 4.2.2 进一步探索 PI3K 亚型选择性抑制剂耐药机制 | 第49-50页 |
| 致谢 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-55页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第55-56页 |
| 综述 抗肿瘤小分子激酶抑制剂耐药机制研究进展 | 第56-68页 |
| 参考文献 | 第63-68页 |
