| 摘要 | 第4-7页 |
| Abstract | 第7-10页 |
| 英文缩略语 | 第11-14页 |
| 1 前言 | 第14-18页 |
| 2 材料和方法 | 第18-32页 |
| 2.1 材料与试剂 | 第18-19页 |
| 2.1.1 菌株,表达载体和细胞系 | 第18页 |
| 2.1.2 主要抗体及试剂 | 第18-19页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第19页 |
| 2.2 实验方法 | 第19-32页 |
| 2.2.1 细胞培养 | 第19-20页 |
| 2.2.2 慢病毒包装建立稳定沉默细胞株 | 第20-22页 |
| 2.2.3 原核表达载体pGEX-5X-1-PKM2质粒的构建 | 第22-24页 |
| 2.2.4 Atg7敲减对糖酵解通路相关分子的影响 | 第24页 |
| 2.2.5 Atg7对细胞葡萄糖消耗和乳酸生成的影响 | 第24-25页 |
| 2.2.6 Atg7过表达,敲减及敲除细胞糖酵解水平和氧消耗水平检测 | 第25-28页 |
| 2.2.7 Atg7对PKM2总蛋白和Tyr105位点磷酸化的影响检测 | 第28页 |
| 2.2.8 Atg7与PKM2相互作用的验证 | 第28-30页 |
| 2.2.9 Atg7对PKM2与其上游直接激酶FGFR1相互作用的影响 | 第30页 |
| 2.2.10 饥饿和bFGF刺激对shRNA-NC细胞与shRNA-Atg7细胞中PKM2总蛋白和磷酸化蛋白的影响检测 | 第30页 |
| 2.2.11 细胞增殖的检测 | 第30-31页 |
| 2.2.12 细胞迁移能力检测 | 第31-32页 |
| 3 结果 | 第32-47页 |
| 3.1 Atg7稳定沉默细胞株构建 | 第32页 |
| 3.2 Atg7敲减细胞糖酵解过程相关分子表达增高 | 第32-33页 |
| 3.3 Atg7抑制细胞的葡萄糖消耗和乳酸生成 | 第33-34页 |
| 3.4 Atg7抑制细胞的胞外酸化率(ECAR),不影响细胞的氧消耗率(OCR) | 第34-36页 |
| 3.5 Atg7抑制PKM2的Tyr105位点磷酸化,但不影响PKM2蛋白水平表达 | 第36-37页 |
| 3.5.1 Atg7敲除小鼠的组织检测PKM2Tyr105位点磷酸化情况和PKM2总蛋白情况 | 第36页 |
| 3.5.2 细胞水平PKM2Tyr105位点磷酸化情况和总蛋白情况检测 | 第36-37页 |
| 3.6 Atg7,PKM2以及FGFR1三者相互作用 | 第37-40页 |
| 3.6.1 体外GST-pulldown证明PKM2与Atg7的直接相互作用 | 第37-38页 |
| 3.6.2 免疫共沉淀验证PKM2与Atg7体内互作 | 第38-40页 |
| 3.7 免疫共沉淀验证Atg7与FGFR1体内互作 | 第40页 |
| 3.8 应激条件下,免疫共沉淀验证PKM2与Atg7在体内互作情况 | 第40-41页 |
| 3.9 Atg7阻碍PKM2与其上游直接激酶FGFR1的相互作用 | 第41-44页 |
| 3.10 饥饿和bFGF刺激,对PKM2磷酸化和总蛋白的影响 | 第44-45页 |
| 3.11 bFGF刺激对Atg7敲减细胞增殖的影响 | 第45-46页 |
| 3.12 Atg7敲减促进细胞上皮间质转化 | 第46-47页 |
| 4 讨论 | 第47-51页 |
| 5 结论 | 第51-52页 |
| 本研究创新性的自我评价 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-57页 |
| 综述 | 第57-65页 |
| 参考文献 | 第61-65页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第65-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 个人简历 | 第67页 |
